主题：【资料】-农药标样的配制及茶叶样品处理

三、茶叶样品中残留农药的提取
    茶叶样品主要是指干茶样品，和普通农产品的区别在于茶叶中的生化成分复杂，仅挥发性成分就有600多种，对于农药残留检测工作是相当大的挑战，提取是茶叶中农药残留检测的首要步骤，一方面要最大限度地从茶叶中提取出残留农药，同时要尺可能避免将干优物提取出来。提取液中干扰物过多，检测时可能产生错误的信号，造成检测结果偏高或假阳性的出现。干扰物的去除主要是通过净化步骤来实现，若将过多的干扰物提取出来，会加大下一步净化工作的难度，如能事先在提取过程中加以考虑，就可以简化净化步骤。
   
1.提取溶剂的选择
  提取溶剂的选择要考虑两个方面，首先是所要检测的农药的种类和这些农药的性质，其次是提取溶剂对茶叶中生化组分的共提取情况。通常根据相似相溶的原则，低极性的农药用低极性的溶剂提取，高极性的农药用高极性的溶剂提取。对于有机氯类农药，如六六六、DDT类都是非极性的农药，不溶于水，用正己烷作为提取溶剂比较理想，为了让溶剂对茶叶有一定的渗透性，可以加人适当比例的丙酮。这对拟除虫菊酚类农药的提取也适用。有机磷类农药的提取，因其性质从非极性到极性的跨度比较大，如敌敌畏、甲胺磷、氧乐果等水溶性很好，而水胺硫磷、二唑磷等水溶性很小，可选用丙酮、乙睛、乙酸乙醋等有机溶剂，这些溶剂虽然对茶叶中茶多酚、咖啡碱、色素等的提取效率也很高，但有机磷类农药的检侧所常用的火焰光度检侧器(FPD)对它们并不敏感。如果有很有效的后续净化手段，选用丙酮、乙腈等溶剂，即使造成茶叶共提取物的增加，也还是可以接受的。

2.茶叶中残留农药的提取方法
    茶叶中残留农药的提取，本质上是液-固萃取，包括溶解和扩散两个过程，主要影响因素有：温度、时间、萃取溶剂的性质、样品的特性等传统的提取方法有浸泡提取、振荡提取、组织捣碎、索氏提取等。这些方法的共同点是使用大量有机溶剂，使样品和溶剂充分接触，而达到对样品中残留农药的提取。
   
近些年，新的提取方法也不断出现，主要有超声波提取、超临界流体萃取(SFE)、基质固相萃取(MSPD)、固相微萃取(SPME)、微波萃取(MAE)及加速溶剂萃取( ASE)等。
   
(1)浸泡提取。是将茶叶磨碎后，用单一或混合溶剂浸泡，一般是浸泡过夜，时间10-12h,适合于大批量样品的处理。

(2)振荡提取与浸泡提取相似，在浸泡的同时加上机械振荡，缩短浸泡提取的时间。

(3)组织捣碎是将茶叶和提取溶剂混和，通过高速捣碎装置捣碎和提取，时间较短，但样品需逐个进行提取。
   
(4)索氏提取是用特殊的回流装置，使提取溶剂在加热条件下对样品反复提取，提取较完全，但时间很长，而且样品需逐个进行提取，因此索氏提取不太常用。
   
(5)超声波提取。原理是利用高频率声波在溶剂中产生无数微小振荡的气泡，这些气泡在物体表面炸裂，可产生瞬间的高压流休不断冲击固休样品表面，而达到提取的目的。

(6)超临界流体萃取。超临界流体，是某种物质在超过其温度和压力的临界点后的存在形式，介于气体和液体之间，既具有液体的溶解能力，也具有气体易于扩散的特性，是理想的萃取剂。常用的超临界流体是临界条件较低的二氧化碳，二氧化碳具有化学性质稳定、无毒、无污染、沸点低，易于从萃取物中除去等诸多优点。
   
(7)基质固相萃取。是将降品与固相萃取填料（如C18、弗罗里硅土等)直接混合研磨，装柱淋洗，是集提取和净化为一体的方法。已在水果、蔬菜的农药残留检测上得到应用。

(8)固相微萃取。是将一根涂有固定相(如聚二甲基硅氧烷、聚乙二醇二烷等)的石英纤维的萃取头，直接浸人样品或样品提取液中，对目标化合物进行吸附，极性化合物选用具有极性涂层的萃取头，非极性化合物选用非极性涂层的萃取头。经一定时间的吸附平衡后，把萃取头直接插到气相色谱( GC)进样口上，在高温下解吸附进样，或在液相色谱(HPLC)上经溶液溶解进样。该方法具有快捷、不用萃取溶剂、重现性好等特点。尤其是对水中污染物的检测具有突出的优势。
   
(9)微波萃取。利用极性分子可以迅速吸收微波能量并转化为热能，从而使溶剂温度快速上升的原理。常见的极性溶剂有甲醇、乙睛、丙酮等。非极性溶剂则不能吸收微波，因此在用微波萃取时，一般使用非极性溶剂中加人一定比例极胜溶剂的混和溶剂。微波萃取在聚四氟乙烯制成样品杯和可密封、耐高压的密封罐内进行，溶剂加热后在密封罐内产生高压，并使溶剂沸点升高，提高了萃取效率。微波萃取较适合有机氯类农药残留的提取，有实验表明，在较短时间内对有机氯类农药的回收率，可达到经典的索氏提取或美国EPA标准方法的效果。

    (10)加速溶剂萃取。它是在较高的温度和压力下，用溶剂对样品进行提取，和微波萃取有相似的地方，在较高的压力下，溶剂沸点升高，可在较高的温度下以液态存在，待萃取
组分的溶解和扩散能力会有大幅度的提高，而溶剂在较高的温度和压力下表面张力较小，更容易浸润、渗透进人样品内部，从而提高了萃取效率。加速溶剂萃取具有快速、溶剂用量少、自动化程度高、萃取效果好等优点，已在美国的EPA3545、德国的L00.00.34 (1999)和我国的GB/T19649-2005等标准方法中使用，但成本较高。
   
对茶叶中农药残留检测而言，日前浸泡提取、振荡提取、组织捣碎以及超声波提取是大多数实验室使用的方法。超临界流休萃取更多应用于植物成分的提取等工业生产过程，微波萃取、加速溶剂萃取方法由于能明显缩短萃取时间，则可能是将来提取技术的发展方向，但这3种方法所需的设备一次性投人比较大，不是普通实验室所能够承担的，而且对于大批量样品的提取，也不具有明显的优势。