4 分析步骤
4.1样品预处理(3)
取样品10~50ml于分液漏斗中,加3~5倍体积的石油醚,充分混合后加入N,N-二甲基甲酰胺10~50ml,充分振荡。静置分层后,分取下层的N,N-二甲基甲酰胺于另一分液漏斗中,石油醚仍有颜色时,再加N,N-二甲基甲酰胺5~30ml,充分振荡萃取出色素,反复萃取,直到N,N-二甲基甲酰胺无色为止。合并全部N,N-二甲基甲酰胺萃取液,加入其1/2体积的石油醚,充分振荡后弃去石油醚。此操作重复二次后,在二甲基甲酰胺溶液中加入同体积的水稀释,再加1/2体积的氯仿,充分振荡,静置分层。分取氯仿层于另一容器中。N,N-二甲基甲酰胺液仍有颜色时,反复萃取,直到氯仿层无色为止。合并全部氯仿液,加其1/2体积的水,充分振荡弃去水相,将氯仿萃取液移人另一干燥容器中,加无水硫酸钠脱水,过滤,以尽可能低的温度蒸发。残留物溶于少量的苯作为样品溶液。
层析柱(内径1cm、长30cm,一端有狭细部)保持垂直,其狭细部的上面塞上预先浸渍石油醚并除去气泡的脱脂棉。取硅胶8g于100ml烧杯中,加石油醚30ml充分搅拌除去空气,用湿法填充在层析柱中。硅胶全部沉降后,在硅胶上面盖上比玻璃管内径稍小的圆形滤纸。待柱上部残留的石油醚全部渗入拄内时(注意液面不可低于柱面),把样品溶液徐徐注入层析柱内,然后用苯层离,并将柱上已分离的色带溶出(溶液的流出速度lml/min)(4),稀释成适当的浓度作为吸收光谱、滤纸层析及薄层层析用待测溶液A。
用苯溶出色素后,柱内仍残留着色带时,再用氯仿(4)将色带溶出。此溶出液作为吸收光谱测定、滤纸层析和薄层层析用待测溶液B。
4.2 测定
4.2.1 吸收光谱法:测定待测溶液A的可见吸收光谱,并与红色501号(药用腥红)(5)、红色505号(油红XO)(6)、橙色403号(橙SS)(7)、黄色404号(黄AB)(8)、黄色405号(黄OB)(9)、绿色202号(醌茜绿SS)(10)、蓝色403号(苏丹兰-B)(11)及油红OS(12)的吸收光谱比较和判定。
再测定待测溶液B的可见吸收光谱,并与黄色204号(喹啉黄SS)(13)的吸收光谱比较和判定(14)。
4.2.2 滤纸层析法:将待测溶液A及色素标准溶液3.6.1的各标液分别点在用液体石腊浸过的同一滤纸,距下端4cm的位置,二点之间隔lcm,用展开溶剂3.4.1,3.4.2或3.4.3展开20~25cm。
待测溶液B则用色素标准3.6.2与上述同样操作。
4.2.3 薄层层析法(15):将薄层层析用待测溶液A及色素标准溶液3.6.1分别点于同一薄层上,用展开溶剂3.5.1,3.5.2,3.5.3或3.5.4展开。
待测溶液B,则用色素标准液3.6.2及薄层展开溶剂3.5.4与上述同样操作。