毛细管区带电泳一次基线乱的处理过程
在用毛细管电泳进行分离和检测时,经常会出现基线或谱图不好的情况,下面就这种现象可能存在的原因进行分析,将这种谱图乱分为两种情况,一种为进样前,另一种为进样后来分析,首先看一下进样前出现基线乱、上下乱跳的情况(如图1),及可能的原因。
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图1 区带电泳基线谱图
一、进样前出现类似的问题可以按一下步骤来排查:
1、判断这样的谱图出现的几率,如果是经常出现,那这就说明仪器或是实验条件存在问题;
2、先确定柱子处理好了么,新购买的毛细管柱子管壁有很多酯类物质和杂质,而且管壁的羟基也需要活化,如果柱子处理不好很容易出现如图1这样的基线。
3、如果柱子处理没有问题,我们应该检查一下缓冲溶液是不是存在问题,配置的时间是不是太久了,如果时间太久了,缓冲溶液里边就会出现絮状的物质,这样也会导致上述现象的发生。
4、确定检测器处或柱子的检测口处是不是污染。从仪器上取下卡盒,取下柱子,查看柱子的检测口处和固定毛细管检测窗口的位置是不是不干净,如果有可以把用乙醇清洗或擦拭!
5、检查一下电泳仪的电极是不是弯了,有的时候电极弯了也会影响基线。
经过排查发现发现毛细管的检测口处有污物,用酒精棉将其试去,在走基线,得到如下谱图,如图2所示。
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图2
二、进样后出现谱图乱的情况,可能的原因如下:
1、溶解样品所用的溶液和缓冲溶液不一致。这种情况下,由于缓冲溶液是一个背景值,进样后,样品溶液又是一个背景值,所以很容易出现这种情况,这种情况下还很有可能出现平台谱图!
2、确保样品的稳定性。查阅相关资料,确定样品在所选用的缓冲溶液里边是不是稳定,如果不稳定,容易降解,很容易出现图1的情况,就应该选用其他体系的缓冲溶液。
3、pH问题。如果溶解样品溶液的pH和缓冲溶液的pH不一致,进样后同样会出现这样上下跳动的谱图。
以上是从实验中发现和总结的部分可能的原因,请大家提出宝贵意见!