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主题：【求助】关于检测核苷酸的难题

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发表于：2010/08/17 16:34:43 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请教各位，近期俺要设计一个实验，但经过4、5天反复思考和查资料都没有找到太好的方案，遂进来赐教！
是这样的，有一个混合样品，已知里面含有蛋白质（少量）、多肽和游离氨基酸（占绝大部分≥50%）、核苷酸（可能有三种存在形式：核苷、核苷酸、碱基）、还有其他可溶性化合物质。
要求：检测样品当中核苷酸的含量。
疑难：由于样品中多肽和游离氨基酸含量较多，遂不能用紫外分光光度计法测量（蛋白质和核苷酸的吸光峰值很相近，只有在蛋白质含量（包括蛋白质、多肽和游离氨基酸）较少的情况下用此法才准确）。
        我的思路是，先把多肽和游离氨基酸与核苷酸分离开，然后再用紫外分光光度计法测量核苷酸含量。但本人才疏学浅，不知用什么方法才能把两者分离开。请各位赐教~~
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2010/8/18 23:02:24 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
其实我觉得用液相-紫外检测器最好，如果楼主手头有的话，是首选
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2010/8/18 23:03:22 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
至于分离，首先可以考虑采用蛋白质的等电点来考虑，通过调节PH来让蛋白质沉淀
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2010/8/18 23:04:11 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
也可以考虑离心的方法，看是否能分离
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2010/8/18 23:04:46 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
最后考虑加入沉淀剂，因为一般加入沉淀剂也可能会沉淀目标组分
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2010/8/18 23:05:23 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主做这方面实验，看来是高手，有机会多请教
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2010/8/18 23:06:20 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
最后，如果确实分不开，可以考虑二阶导数对谱图进行处理，看能否消除蛋白质的干扰
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鸿雁
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2010/8/23 17:16:22 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
二虎的回答也很精彩啊，一看就是经验十足
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2010/8/24 21:03:40 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 鸿雁(3859085) 发表:
二虎的回答也很精彩啊，一看就是经验十足

还不知道楼主做的怎么样了
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