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一、背景
1.1莫能菌素﹝Monensin﹞是聚醚类离子载体抗生素,是一种
反刍动物中运用较广泛的饲料添加剂;原为
链霉菌所分泌的一种物质,具有控制
瘤胃中
挥发性脂肪酸比例,减少瘤胃中蛋白质的降解,降低饲料干物质消耗,改善营养物质利用率和提高动物能量利用率等作用。
1.2莫能菌素为百盛客户对肉类原料中兽药残留的监控项目,为了应对客户要求,满足实验室检测要求,对莫能菌素进行新项目技术开发。盐霉素为原有分析项目,此次技术开发对盐霉素前处理及仪器分析条件重新优化,与莫能菌素合并同为聚醚类抗生素检测检测方法。
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二、前处理流程
2.1提取
称取(2.00±0.02)g样品,加入10mL乙腈混匀,再加入3.00g无水硫酸钠,震荡混匀,超声提取10min;离心取上清液于50mL离心管中,残渣加入5mL乙腈重复提取,合并两次上清液,定容至20mL,加入5mL乙腈饱和正己烷,震荡离心。
2.2净化
取下层(乙腈层)5mL于圆底烧瓶中,旋转蒸发至1mL,氮气吹干。
普通肉类基质:圆底烧瓶中加入1mL乙腈超声溶解。
内脏类基质:圆底烧瓶中加入3mL甲醇+水(1+1)超声溶解,过Waters HLB柱(waters oasis HLB 6cc/200mg依次用5mL甲醇 5mL水活化),用5mL水淋洗,5mL甲醇洗脱于100mL圆底烧瓶中,40℃减压蒸干,加入1mL乙腈超声溶解。
三、仪器分析条件(
LC-MSMS8050)
3.1质谱参数:
离子源ESI源; Nebulizing Gas Flow: 3 L/min; HeatingGas Flow: 10 L/min; Interface Temperature 300 ℃;DLTemperature 250 ℃;Heating Block Temperature 400℃ Drying Gas Flow: 10 L/min
化合物名称 | Precursor m/z | Product | Dwell Time | Q1 Pre | CE | Q3 Pre |
m/z | (msec) | Bias(V) | Bias(V) 1 |
莫能菌素 | 688.6 | 635.50* | 100 | -26 | -18 | -28 |
688.6 | 461.35 | 100 | -26 | -26 | -30 |
688.6 | 617.5 | 100 | -26 | -24 | -28 |
盐霉素 | 773.1 | 431.20* | 100 | -28 | -53 | -28 |
773.1 | 531.35 | 100 | -28 | -46 | -36 |
773.1 | 413.2 | 100 | -28 | -53 | -27 |
3.2
液相参数:
流动相组成:A: 0.1%甲酸 B: 乙腈;流速:0.35Ml/min;A -10% B -90%恒流分析;进样量:2uL;色谱柱型号:ODS-III 1.6μm
四、实验结果及分析
4.1线性
配制盐霉素、莫能菌素混标(稀释溶剂:乙腈),0.1ug/kg、1ug/kg、5ug/kg、10ug/kg、20ug/kg五个浓度点,仪器分析线性如下:
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以上实验中,盐霉素、莫能菌素标准曲线R
2均大于0.99,各浓度点精密度良好;仪器分析标准品线性、稳定性符合实验要求。
4.2选择性
选取牛肉样品进行空白、添加回收实验,实验谱图如下:
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4.3真度
对空白牛肉进行前处理,采用空白样品萃取液与溶剂稀释统一标准品标准品,同一浓度下两者峰面积比值的百分比作为真度评价参数,实验结果及谱图如下:
基质类型 | 化合物名称 | 基质稀释标准品 | 溶剂稀释标准品 | 真度(%) |
牛肉 | 盐霉素 | 116,440 | 107,537 | 106.4% |
莫能菌素 | 9,845 | 13,312 | 74.0% |
以上实验中牛肉基质对盐霉素无明显基质效应,对莫能菌素产生一定的基质效应,基质效应在70%左右,在可接受范围之内,日常分析准确定量可以做spiked校正。
6实验总结
本次试验,从前处理、仪器分析、实验分析的真度、精密度、准确度等多项参数验证了此方法的适用性及准确性,可初步满足试验要求,后续继续多基体验证。