主题：【分享】【实战宝典】液相色谱柱的分离原理有哪些？

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发表于：2021/03/18 22:37:05 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

解答：（1）分离原理：样品组分在流动相和固定相之间进行分配，由于不同组分在流动相和固定相之间的相互作用能力（吸附、分配、离子交换、分子尺寸等）不同，使得不同组分在液相色谱柱上的移动速率不一样，从而产生色谱分离。

（2）按照分离原理不同，液相色谱柱分离模式可分为正相、反相、离子交换、离子抑制、亲水作用等。下面简单介绍一下各种分离模式的原理及区别：

a.正相色谱是液相色谱的经典分离模式，使用极性固定相和非极性流动相，待测组分通过其极性基团和固定相上的极性基团作用被保留。正相色谱的经典应用是使用未键合的硅胶和氧化铝，但现在使用的极性键合相有以下优点：键合相平衡快、对流动相中微量的水不敏感、选择性好。各种极性键合相中二醇基键合相比纯硅胶极性小，平衡速度快；氰基键合相是保留能力最小的正相吸附剂；氨基键合相适宜分离芳香族碳氢化合物。

b.反相色谱已成为最流行的色谱分离模式。反相色谱中，使用非极性固定相和极性流动相。典型的流动相一般是水或水系缓冲液与甲醇、乙腈或四氢呋喃的混合物。典型的固定相是用脂肪烃硅完化的硅胶键合相，其他用于反相色谱的基质有石墨化碳和苯乙烯-二乙烯苯基质。反相色谱的性能还受残留的硅醇基活性的影响，由于硅醇基能与待测物质的极性基团相互作用，例如，常能观察到碱性物质在硅醇基活性高的填料上产生拖尾峰。因此，根据硅醇基的活性不同，填料显示出不同的选择性。修饰硅醇基活性的一个办法是封端，即用硅烷化试剂把硅醇基转变成三甲基甲硅烷基基团。不过，即使是作了封端，基质表面的硅醇基密度还是比键合配基的密度大。硅醇基的活性也和硅胶的预处理（基质灭活）、硅胶纯度有关。碱性分析物的色谱分析推荐使用高纯度硅胶基质、充分封端的键合相。未封端的填料在许多应用中有可以获得不同选择性的优点。

c.使用带有离子电荷的固定相，可以根据待测组分的电荷进行分离。对于硅胶基质的离子交换填料，离子基团通过标准的硅烷化技术键合到硅胶表面。对于聚合物基质的离子交换填料，离子交换基团分布于交联聚合物的整体。有四种离子交换填料：强/弱阳离子交换填料和强/弱阴离子交换填料。弱离子交换填料的特征是电量与pH值有函数关系，以羧酸基为功能基的离子交换剂是弱阳离子交换剂的代表。弱阴离子交换剂由一级、二级、三级铵为功能基。大部分强离子交换剂的电荷与pH值无关。四级铵形成强阴离子交换剂，而磺酸基构成了强阳离子交换剂。所有这些离子交换基团都可以在聚合物基质上见到，主要用于分离生物大分子。除了弱阳离子基团外，其他功能基都可以键合到硅胶上。

d.离子抑制（离子对）色谱广泛用于在低pH下分析洗脱液中的有机酸，它只是反相色谱的一个分支。特殊的聚合物固定相适用于这种应用，因为耐酸碱范围大。亲水作用色谱将正相色谱扩展到水系洗脱液，用极性固定相配合水-有机流动相，与反相色谱相反，保留随有机相的增加而增加。这种应用多用胺丙基键合相作固定相，另外，硅胶、二醇类或其他极性固定相也有应用。通常应用胺丙基固定相来分离碳水化合物，专门设计用于这种应用的柱子称为糖柱。

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