畜产品、水产品由于样品中含有较多的蛋白、脂肪、磷脂等杂质干扰，加之硝基呋喃代谢物类检测需要衍生后才能提取目标物，该类化合物前处理步骤较繁琐，容易出现回收率不高的情况，现将论坛里硝基呋喃代谢物类检测过程中出现的典型问题归纳总结，并结合自己的实际实验过程梳理了各位版友的解答。

1、问题描述：根据《GB/T 20752-2006》硝基呋喃前处理中第一步要洗涤，可是洗涤完是不是会影响回收率，洗涤这个过程到底需要还是不需要呢？

解答：《GB/T 20752-2006 猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》规定试样在衍生前，需要在试样中加入10 mL甲醇+水混合溶液（2+1）均质，然后离心弃去上清液，这一步洗涤的主要目的是降低呋喃西林代谢物（SEM）的误判：由于SEM产生机理复杂、来源多样，可能的外源性污染来源包括偶氮甲酰胺（面粉中常见物质）、水产品的甲壳素、次氯酸钠消毒副产物、瓶盖密封垫和胶带等，特别是对于甲壳类、有鳞水产类和表面裹有面粉的加工制品等样品，都需要经过上述方式洗涤，洗去游离态代谢物，只测定结合态代谢物，降低“假阳性”误判；同时该洗涤步骤还可以去除样品中组织粘液、色素等干扰杂质，减少分析干扰，降低基质效应。

2、问题描述：根据《农业部783号公告-1-2006 水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》标准测硝基呋喃，最后一步用5%甲醇水定容后很浑浊是怎么回事呢？

解答：用5%甲醇水定容出现浑浊，说明溶质过饱和（可能是样品的脂肪、蛋白等含量过高所致），通常是前处理过程中净化步骤不彻底导致的：由于前处理过程需要试样在盐酸环境中衍生16小时，该过程中样品中部分蛋白发生了水解残留在盐酸溶液中，后期调节pH值到7也不能去除，用乙酸乙酯反提目标物时不少杂质进入到有机层，直接旋蒸定容后容易变浑浊。

一般解决方法有两种：一是定容后置于冰箱（4℃）冷藏2小时以上，使脂肪充分析出，取出后高速冷冻离心，取上清液进行检测；二是参考《GB/T 20752-2006》标准的处理方式——加入10 mL甲醇+水混合溶液（2+1）均质，然后离心弃去上清液再过HLB小柱净化效果更好。

3、问题描述：《农业部783号公告-1-2006》、《GB/T 21311-2007》等硝基呋喃代谢物类检测标准都需要将衍生溶液pH调节到7-7.5，请问其原理是什么？调节成其它pH值是否可行？

解答：大量研究表明，在pH为7-7.5的弱碱性条件下，乙酸乙酯对AOZ、AMOZ、AHD、SEM衍生产物的提取效率最高（能达到90%以上），因为弱碱环境可以抑制目标物的电离，使其绝大部分呈分子状态存在于衍生溶液中，有利于乙酸乙酯对目标物的提取或HLB固相萃取柱的吸附，从而增强富集净化的效果。但当pH值为8-10时，乙酸乙酯对AHD的萃取效率很低，因此需要将硝基呋喃代谢物酸性衍生溶液的pH值调节到7-7.5范围，再进行下一步富集净化。

4、问题描述：关于硝基呋喃衍生化时间讨论:液质法做硝基呋喃一般要衍生16小时，是因为水解需要这么长时间还是因为衍生需要？

解答：硝基呋喃类在37℃时衍生16 h，主要是从工作方便角度方面考虑的，头一天下午开始衍生，第二天上班拿出来开始前处理时间相对比较宽裕，和β受体激动剂前处理步骤的酶解时间类似。当然也可以适当缩短衍生时间，有一些文献对硝基呋喃类衍生时间和温度进行了比较和优化：陈煜玲等研究表明，37℃水浴超声45 min能达到恒温衍生16 h的效果。