主题:【讨论】与HPLC色谱柱有关的十大神话

浏览 |回复81 电梯直达
plexu
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Myth 3: Guard Columns Do Not Affect a Separation
False. First of all, having a guard column is a good idea. However, the choice of a guard column can have a great effect on a separation if the wrong configuration or phase is chosen. Remember, the purpose of a guard column is to protect the analytical column against fouling by highly retained sample components, particulates, and other undesirable materials. The guard column is much less expensive than the analytical column that it protects. Thus, it can be replaced more often rather than the more expensive analytical column.
Ideally, the guard column chosen should have the exact same stationary phase as used in the analytical column. If the phase is more retentive (for example, has a greater carbon loading or is a mixed-mode phase), then it can affect the separation in a detrimental manner by causing retention time shifts or even selectivity differences. If the phase is less retentive, it might or might not cause a problem unless the phase chosen impacts the overall selectivity.
For the guard column to have minimal impact on separation performance, it must be properly plumbed into the flow stream. Obviously, the guard column is inserted between the injector and the analytical column but if too much connecting tubing (either too long or two large of an internal diameter) is used, extracolumn band spreading can occur that can affect the overall separation. Systems employing integrated guard columns where the guard column literally butts up against the analytical column would offer the best solution. However, integrated guard columns usually are associated with cartridge column systems, which seem to have come into disfavor. Whatever the configuration, the guard column should be able to be removed easily and replaced from the HPLC system without affecting its operation.
Theoretically, if the guard column is adding additional column length to the analytical column, there should be additional plates generated that should increase the chromatographic resolution. However, due to some of the factors discussed previously, often the addition of a guard column just maintains the separation at best and sometimes detracts from it at worst. The advantage of the guard column is increasing column life and not necessarily increasing the overall efficiency.
宁夏恋冰
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1.色谱柱可以反向使用(试过)
2.保护柱脏了会影响色谱分离效果
3.1000针!不敢苟同,样品跟样品也不一样!
雪妖
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每一种说法好像都有点歧义
英文实在看不懂,
不过好像看见说月旭的色谱柱是可以反冲的,
从开始接触LC就听说不能反冲也就一直记住了
不是所有的C18柱都是一样的
不同的色谱厂家对硅醇基的表面处理不一样,导致每个厂家的色谱柱分离效果都是不一样的,就算是相同厂家不同批次之间的色谱柱也会有差别的
fulinx
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楼主翻译的太好了,受教!感谢!
硅胶表面键合处理的不同导致不同厂家的C18柱多少会有差别,对某些样品来说可能差别还挺大。
jaichina
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雪妖
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呵呵,楼主翻译得真的很好
以前知道一些,但是不知道具体怎么回事
学习很多呢
plexu
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翻译比自己写有时还要费功夫,最近事务比较繁忙,非常抱歉让各位久等了!
plexu
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神话三:保护柱不影响分离效果

错误!首先,配一个保护柱是个好主意。如果保护柱的式样或固定相选择错误,保护柱也能够对分离效果有很大的不良影响。要明确的是:保护柱是保护分析柱避免被强保留的组分、颗粒物和其它一些不需要的东西污染用的。保护柱比起分析柱便宜许多,所以污染的保护柱能够比分析柱替换的更加频繁。
理想的情况是,保护柱的固定相选择和分析柱恰好相同。如果保护柱中填料的固定相保留更强(如高载碳量和混合相),就会使保留时间发生漂移,甚至导致不同的选择性;如果保留相对弱,问题就不那么明显,除非固定相影响整个体系的选择性。
为使保护柱最小化地影响分离效果,保护柱需要合适的装配。显然,保护柱应安插在进样口和分析柱之间,但是如果管路太长(太长或者内径太大),就会造成额外的峰展宽,从而影响分离。系统引入整合型保护柱(保护柱直接接在色谱柱上),从以往的报道看,基本上会是最佳的。但是,整合型保护柱通常和卡套式可换柱芯的色谱柱一起使用,目前这种色谱柱已不是那么流行。不管采用什么形式的保护柱,都应当在不影响操作的前提下容易从HPLC系统中卸下和更换。
理论上,接上保护柱延长了分析柱的柱长,会增加柱效和色谱分离效果。但由于上面讨论中的一些因素的影响,增加保护柱只能维持原来的色谱分离性能在最佳水平,有时候甚至会变差。使用保护柱的好处是延长柱寿命,而非提高整体色谱分离效果。
plexu
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神话四:提高温度往往有利于分离效果

错误! 随着温度升高,流动相粘度下降,分析物传质速率因此提高,色谱分离效果会变得更好。这是对的,但是除了柱效,温度同样影响保留因子(k)和选择性(α)。温度的变化既能够提高分辨率(其实这也是色谱分析最关心的问题),有时也会使分辨率下降。保留时间往往随着温度升高而降低,因为温度作为一个热力学参数,在较高温度下,分析物倾向于留在流动相中,分析物会更快的从柱子上被洗脱下来。然而,不同的化合物保留时间随温度变化会有不同的响应程度。更加确切的说,它们的范德霍夫线的斜率不同(ln k与1/T,T以绝对温度计量);换句话说,温度变化,化合物之间的选择性α值会发生改变。另外温度增加会使低k值的色谱峰出峰更快,甚至接近在无保留物质出峰时间t0附近出来,导致很难进行定量分析。

以镇痛药的分析为例,图二显示的一系列的色谱图列出了七种镇痛药在柱温20-90°C的分离情况变化。我们从中可以发现许多特点。首先,所有分析物随着温度升高,保留时间变短且峰变窄,意味温度升高利于分离效果。其次,镇痛药之一的水杨酸(即阿司匹林),在峰5和峰6之间,随着温度变化位置改变较大。事实是,在20-40°C时,该物质随温度变化,洗脱顺序也发生了变化。在中间的30℃时,水杨酸和第6号峰的非那西丁一起出峰。在这个实例中,温度大于40°C,导致了分离时间变短和洗脱顺序发生变化。
当然,一个提高温度的好处在于降低了操作时的柱压,以便于使用更大的流速和粒径更小的填料。另一个在高温下能够导致色谱柱性能问题的因素是流动相的温差。如果柱子在60°C下操作,但是流动相在室温流入,那么进入的较冷的流动相就能够引起峰变形,原因是不同温度下分析物会趋向在高温的流动相中。所以建议大家在较高柱温下使用色谱柱时一定记得预热流动相。


1234chen
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确实都是似是而非的说法。世界上没有绝对的东西,看你在什么场合应用它。正确的东西用在不恰当的场合,那也是错的。要从不同角度去分析问题。
thanks for Plexu great job!!!