主题:【讨论】与HPLC色谱柱有关的十大神话

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原文由 wujin777600(wujin777600) 发表:
所有的C18色谱柱都是一样的,不对!
这句话字面上讲也是对的,如所有的中国人都是一样的。
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原文由 plexu(plexu) 发表:
神话一: HPLC色谱柱不能反转使用

错误!实际上HPLC色谱柱的填装压力比最大使用压力高很多(通常会高2倍)。如果装柱时使用了恰当的匀浆剂,并且分配一定的时间使柱床稳定,一支填装良好的色谱柱是完全可以双向使用的。需要反向使用色谱柱的情况包括:柱转换时的反冲、柱头被强保留物质吸附污染的色谱柱清洗(反冲的冲洗路径更短更合理)、冲洗残留在筛板上的颗粒物以降低柱压或防止柱压升高。
反向使用色谱柱有一个例外,就是生产商在色谱柱的进样端使用了孔径更大筛板的情况, 反向使用可能会将填料从柱床冲出。色谱柱在工厂填装时,出口端的筛板孔径必须比色谱柱中最小颗粒的粒径还要小。譬如,色谱填料平均粒径是5μm,粒径分布范围是3-7 μm, 出口端筛板孔径必须小于3μm ,使填料没有可能从柱床跑到色谱柱筛板外面。大多数生产厂家选择的筛板孔径是2-μm。                                   
为什么有些色谱柱生产厂家会选择入口端和出口端采用不同孔径的筛板呢?很简单,孔径大的筛板相对孔径小的筛板不容易堵,一个 0.5-μm的筛板会比一个 2-μm的筛板被堵得快。所以为了避免柱压上升过快和客户的抱怨,生产商会折中地选择在入口端用一个孔径稍大的筛板,通常色谱柱上就会标一个箭头表示只能在一个方向使用。在反向使用 HPLC色谱柱时,最好仔细看一下说明书或者咨询一下色谱柱生产厂家是否能反向使用。
翻译的很不错,学习了很多新东西,深刻体会到生产商很会关心用户的,如:所以为了避免柱压上升过快和客户的抱怨,生产商会折中地选择在入口端用一个孔径稍大的筛板。
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原文由 plexu(plexu) 发表:
神话二:所有的C18(L1)柱是一样的。

错误! 在HPLC发展初期,十八烷基硅烷(常被称为ODS或C18)是最早的键合固定相之一,也导致了“反相色谱”这个新技术的诞生。C18 成为了反相色谱的标准固定相并被大部分色谱工作者所采用。制药工业是HPLC技术的最早使用者,监管部门不想偏袒任何一家色谱柱生产厂商的品牌名字,FDA和USP编写了一套分类体系,给每一种药物应用方面的新方法一个通用名称。对HPLC色谱柱,命名为“L”,C18因为出现在大部分送审材料中,理所当然就成为了“L1”。随着另外固定相的增加,分别都有了自己的“L”序列号(如:L7是C8,L10是CN基,L11是苯基等等)。
很不幸,这个命名体系被证明是不可靠的。因为每种商品化的C18色谱柱,虽然同样是选用硅胶作为基体,但各自都有自己特定的填料键合合成工艺,因此色谱性能也不相同。譬如,有的生产厂商采用十八烷基一氯硅烷键合试剂和低表面积的硅胶(见图一所示),而其它一些厂家采用同一硅烷试剂但选用了表面积更高的硅胶基体。这两种C18柱表现的色谱性能不同,后者C18固定相的键合比例大于前者。较低的固定相键合比率,表面未反应的硅醇基较多,有时混合保留机理起主要作用。某些色谱柱生产商使用二氯硅烷和三氯硅烷作键合试剂,将键合相聚合反应形成一很厚的具有不同扩散特性的疏水层。为使键合后硅胶表面未反应的硅醇基比例降低,有些生产商用小分子的硅烷试剂(如三甲基氯硅烷)封尾。硅醇基是在中性条件下测定碱性物质时导致色谱峰拖尾的原因之一,有些生产厂家,更进一步的做法是采用第二种小分子硅烷进行双封尾工艺,以提供一个更加惰性(疏水性)的硅胶表面。另外有些生产商采用聚合物基体材料进行C18 键合,生产出一种完全不同的C18填料,但仍然被归类到“L1”。还有厂家采用反应性能不同的硅烷化试剂organoalkoxysilanes,制造出一种与氯硅烷反应产生的不同的C18 固定相。
请问硅胶内部空隙有键合吗?
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原文由 plexu(plexu) 发表:
神话三:保护柱不影响分离效果

错误!首先,配一个保护柱是个好主意。如果保护柱的式样或固定相选择错误,保护柱也能够对分离效果有很大的不良影响。要明确的是:保护柱是保护分析柱避免被强保留的组分、颗粒物和其它一些不需要的东西污染用的。保护柱比起分析柱便宜许多,所以污染的保护柱能够比分析柱替换的更加频繁。
理想的情况是,保护柱的固定相选择和分析柱恰好相同。如果保护柱中填料的固定相保留更强(如高载碳量和混合相),就会使保留时间发生漂移,甚至导致不同的选择性;如果保留相对弱,问题就不那么明显,除非固定相影响整个体系的选择性。
为使保护柱最小化地影响分离效果,保护柱需要合适的装配。显然,保护柱应安插在进样口和分析柱之间,但是如果管路太长(太长或者内径太大),就会造成额外的峰展宽,从而影响分离。系统引入整合型保护柱(保护柱直接接在色谱柱上),从以往的报道看,基本上会是最佳的。但是,整合型保护柱通常和卡套式可换柱芯的色谱柱一起使用,目前这种色谱柱已不是那么流行。不管采用什么形式的保护柱,都应当在不影响操作的前提下容易从HPLC系统中卸下和更换。
理论上,接上保护柱延长了分析柱的柱长,会增加柱效和色谱分离效果。但由于上面讨论中的一些因素的影响,增加保护柱只能维持原来的色谱分离性能在最佳水平,有时候甚至会变差。使用保护柱的好处是延长柱寿命,而非提高整体色谱分离效果。


1.保护柱现在的价格也不低啊,有些是色谱柱价格的三分之一,保护柱经常更换,很多使用者都喜欢“裸奔”,如果出现问题都是直接换新柱上去。
2.很多问题基本上都出现在保护柱上,本质讲还是一根色谱柱,就是通过保护套的形式串联起来的。
3.谢谢楼主的翻译,长见识啦,现在阅读以前的帖子感觉有味道。
wsy18
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温故而知新,反复阅读会有不一样的体会,所以常常会感到更有味道。
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emmalee07
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这篇文章是整个论坛上难得的精品啊!
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