主题:【第三届原创参赛】鲜乳中喹诺酮(QNS)类药物检测

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一、       


喹诺酮类药物是近20年来迅速发展起来的一类十分重要的广谱抗生素,能抑制细菌DNA螺旋酶,抗菌广谱高效低毒组织穿透力强,已成为兽医临诊和水产养殖中重要抗感染药物之一,被大量用于治疗、预防和促生长,由于其耐药性和潜在的致癌性引起广泛关注。本实验通过ELISA技术研发的新一代试剂盒通过酶标仪进行检测,与高效液相等仪器分析技术相比具有快速、简便、准确和灵敏度高等特点,能最大限度地减少操作误差和工作强度。试剂盒灵敏度:1ppb

关键词:鲜乳、喹诺酮类、酶标仪

二、        实验原理

试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在酶标板微孔条上预包被偶联抗原竞争抗喹诺酮类药物抗体,加入酶标二抗后,用TMB底物显色,样本吸光值与其所含残留喹诺酮类药物的含量成负相关,与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样品中喹诺酮类药物的残留量。

三、        设备

微孔板酶标仪450nm /630nm;旋转蒸发仪、氮气吹干装置;均质器; 振荡器;离心机;天平(感量0.01g);96空酶标板;微量移液器。

试剂:

乙腈(分析纯);正己烷(分析纯);去离子水;标准液;

四、样品前处理方法:

取牛奶2ml,加入10ml乙腈,振荡15min,离心,取上清液3ml吹干;

加入1ml复溶工作液(见配液1),涡动30秒,加入1ml正乙烷,涡动30秒,离心;

除去上层正己烷,取下层水相50ul用于分析。

配液1:复溶工作液

用去离子水将2*浓缩复溶液按1:1体积比进行稀释用于样本复溶。

五、操作步骤:

1、          将所需试剂从冷藏环境中取出,置于室温(20-25℃)平衡30min以上,注意每种液体试剂使用前均需摇匀。

2、          取出需要数量的微孔板,将不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。

3、          洗涤工作液再使用前也需回温。

4、          加标准品/样品:加标准品/样品50ul到对应的微孔中,随即加入酶标二抗50ul/孔,再加入抗体工作液50ul/孔,轻轻振摇混匀,用盖板膜盖好后置25℃避光环境中反应60min

5、          洗板:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,用洗涤工作液250 ul/孔,充分洗涤4-5次,每次间隔10s,用吸水纸拍干。

6、          显色:加入底物液A50ul/孔,轻轻振荡混匀,设定酶标仪于450nm处,测定每孔OD值。




喹喏酮检测分析系统



编号

OD-1

OD-2

平均OD

标液浓度

浓度对数

(b/b0)*100



标准1

1.775

1.639

1.707

0.000

#NUM!

100.0





标准2

1.524

1.468

1.496

1.000

0.000

87.6





标准3

1.289

1.071

1.180

3.000

1.000

69.1





标准4

0.702

0.705

0.704

9.000

2.000

41.2





标准5

0.385

0.391

0.388

27.000

3.000

22.7





标准6

0.197

0.17

0.184

81.000

4.000

10.7



判定标准

以>

240.0

为不合格

检测下限

2

单位:ppb

相关系数

0.9916





标准曲线

编号

OD-1

OD-2

(b/b0)*100

浓度

判断

备注

样品



稀释倍数

1420

0.603

0.549

33.7

56.12

合格

030408

 

4

1421

0.49

0.467

28.0

78.81

合格

030408

 

4

1422

0.49

0.467

28.0

78.81

合格

030408

 

4

1423

0.518

0.482

29.3

73.12

合格

030408

 

4

1424

0.437

0.416

25.0

94.45

合格

030408

 

4

1425

0.46

0.482

27.6

80.89

合格

030408

 

4

1426

0.773

0.762

45.0

31.06

合格

030408

 

4

1427

0.398

0.351

21.9

116.12

合格

030408

 

4



六、判定结果

样本吸光值于喹诺酮类药物的含量成负相关。

百分吸光度(%) = ×100%

B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度

B0—oppb标准溶液的平均吸光度值

七、注意:

a)试验中必须使用一次性吸头,再吸取不同的试剂要更换吸头。

b)必须使用洁净实验器具,以避免污染干扰实验结果。

c)室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温(20-25℃)会导致所有标准的 OD值偏低。

d)再洗板过程中如果出现板孔干燥情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

e)每加一种试剂前需要将其摇匀。

f)试剂盒最佳反应温度为25℃,温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。

g)在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用盖板膜封住微孔板。
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2011/1/17 15:49:48 Last edit by carollee 举报
yuduoling
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飘零
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原文由 yuduoling(yuduoling) 发表:
支持原创,投你一票了[/quote
谢谢!!嗨!!!你是第一人啊!]
尐虎ル)ㄣ灬
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文章是看到了,不知道在那找了一份说明书也能写这个,这还叫原创。里面到处都是错。

还有下边的实验数据一个添加回收测定都没有,还有氟喹诺酮类药物有几十种,你这个方检测那几种都不说一下。

这样的文章一点意义都没有。你还不如好好的写一个奶业中氟喹诺酮检测综述。
bigsea110
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