主题:【第十届原创】保健食品中粗多糖的测定

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高秋荣
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保健食品中粗多糖的测定

西安国联质量检测技术股份有限公司

食品事业部:胡志雄



一、目的:对《保健食品功效成分检测方法》中粗多糖的测定方法(分光光度法)进行方法适用性验证。
二、验证内容:方法适用性验证包括线性范围、重复性、回收率。
三、验证方法:
1  范围
    本标准适用于灵芝破壁孢子粉中粗多糖的含量测定。
2  规范性文件
    《保健食品功效成分检测方法》
3  原理
    多糖经乙醇沉淀分离后,去除其他可溶性糖及杂质的干扰,再与苯酚-硫酸作用成橙红色化合物,其呈色强度与溶液中糖的浓度成正比,在485nm波长下比色定量。
4  试剂和材料
4.1  试剂
实验室用水为双蒸馏水,所用试剂为分析纯级。
4.1.1 无水乙醇(C2H5OH):分析纯。(来源:天津奥普升化工有限公司  批号:20161/19)
4.1.2 葡萄糖(C6H12O6):分析纯(来源:上海金穗生物科技有限公司  批号:AS:9001-22-3 )
4.1.3 苯酚(C6H6O)(来源:天津市天力化学试剂有限公司  批号:20150408 )
4.1.4 浓硫酸(H2SO4)(比重1.84)(来源:上海沃凯生物技术有限公司  批号:20170301 )
以上试剂符合检测要求
4.2  试剂配制
4.2.1 乙醇溶液(80%):取20.0mL水与80.0mL无水乙醇混匀。
4.2.2 苯酚溶液(5%):称取精制苯酚5.0g,加水溶解并稀释至100mL,混匀。
4.2.3 葡萄糖标准溶液:准确称取干燥至恒重的分析纯葡萄糖0.5000g,加水溶解并定容至50mL。
4.2.4 葡萄糖标准使用液:吸取葡萄糖标准溶液1.0mL于100mL容量瓶中,以蒸馏水定容到刻度。

5  仪器和设备
  离心机:4000r/min、电子天平(万分之一)、 分光光度计、水浴锅、漩涡混合器等。
  以上仪器符合检测要求

6  试样处理
  样品提取:称取混合均匀的固体样品1.0-2.0g,置于100mL容量瓶中,加水80mL左右,于沸水中加热1h,冷却至室温后补水至刻度,混匀后过滤,弃去初滤液,收集余下滤液供沉淀粗多糖。
沉淀粗多糖:准确吸取上滤液5.0mL置于50mL离心管中,加入无水乙醇(4.1.1)20mL,混匀,于4℃冰箱静置4小时,以4000r/min离心5min,弃去上清液,残渣用80%乙醇(4.2.1)溶液5mL洗涤,离心后弃去上清液,反复操作3次,残渣用水溶解并定容至25mL。
7  测定:
准确吸取以上试液2.0mL于25mL比色管中,加入5%苯酚溶液(4.2.2)1.0mL,在漩涡混合器上混匀,小心加入浓硫酸(4.1.4)10mL,在漩涡混合器上小心混匀,置于沸水浴中2min,冷却至室温,用分光光度计在485nm波长处以试剂空白为参比,1cm比色皿测定吸光度值。从标准曲线上查出葡萄糖含量,计算样品中粗多糖含量。
8.  公式
试样粗多糖含量按下式进行计算。

式中:
X—样品中粗多糖的含量,mg/100g;  m1—样品测定液中葡萄糖的质量,mg;
m2—样品质量,g;                V1—样品提取液总体积,mL;
V3—粗多糖溶液体积,mL;          V4—测定用样品液体积mL;
V2—沉淀粗多糖所用样品提取液体积,mL。
四、验证数据
1.线性范围
1.1 标准曲线绘制:准确吸取葡萄糖标准使用液(4.2.4)0mL、0.10mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL置于25mL比色管中,补加水至2.0mL,加入5%苯酚溶液(4.2.2)1.0mL,在漩涡混合器上混匀,小心加入浓硫酸(4.1.4)10mL,在漩涡混合器上小心混匀,置于沸水浴中2min,冷却至室温,用分光光度计在485nm波长处以试剂空白为参比,1cm比色皿测定吸光度值。以葡萄糖质量(C)为横坐标,吸光度值(A)为纵坐标,绘制标准曲线,进行线性回归,得回归方程:A=2.6991×C  R2为0.9996。


2 重复性
称取6份试样按照上述处理方法进行试样处理,分别吸取适量样液进行比色,代入标准系列回归方程中求得样液中粗多糖浓度。


由上表可知,芝神堂牌富硒灵芝破壁孢子粉中硒测定的重复性均值为1.047g/100g,RSD值为0.738%,符合规定。
3.回收率
进行6组平行试验,同时进行加标试验,结果见下表:



由上表可以看出粗多糖测定的标准偏差为:0.738%; 加标回收在90%-120%之间

综上所述:从线性、重复性、回收率测试结果可知,均符合方法要求。
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原文由 逆天一棍(fengmo4668)发表:国标上规定的回收率范围在多少?
保健食品介绍的详细全面是一篇优秀文章。
yifan1117
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请问粗多糖的意义是什么?在食品中的主要作用是什么?
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加标回收率酸法应该是这样吧:测得的加标量/加标量*100。
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楼主可曾隔几天后再测粗多糖,其再现性如何?我公司生产的保健品每次测时精密度都较好,可过段时间回测再现性欠佳。我们用的是紫外分光光度计测得,每次都是先走工作曲线再测样品,相关系数一般在两个九,达三个九的几率较少,一直为此事头疼。几个检测人作此实验都是如此。可我们作氨氮,磷,硒等其他工作曲线,R很轻松达三个九以上,可以排除人员因素。另外我们是手摇比色管混匀,还有我们没有放置冰箱于4摄氏度放4小时之一步骤(我公司依据检测标准也没这一步骤)。
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多了解粗多糖,知道了粗多糖在食品中作用巨大!