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主题：【求助】流动相选择问题，麻烦大神指教！感谢！

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Insp_494cf49a
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发表于：2019/12/22 11:02:13 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我的样品蒸干后，用甲醇复溶，进液相分析黄酮组分，一直没有峰，在两三分钟那边有倒峰，应该是溶剂峰。

想看看是不是流动相不对，于是进了一针A相（乙腈），一针B相（乙酸水），一针甲醇，得出来的谱全是倒峰（下面三个图），乱七八糟，这是不是说明流动相不对啊？

但是我是按照文献做的，不知道哪里出问题了。

A-乙腈  B-乙酸水（1：100），DAD检测210-650nm，梯度洗脱。

会不会是乙酸我加的冰乙酸，导致pH变了？

麻烦大神帮我看一下，超级超级感谢！

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hujiangtao
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2019/12/22 15:35:59 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
标样出峰怎么样
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yayicuo
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2019/12/22 20:32:40 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
先走下标样，或者在样品中加入标样来看下峰的情况。
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sdlzkw007
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2019/12/22 21:20:23 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请确认一下是否选择了参比波长；如果是，参比波长是否合适？
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2019/12/22 22:35:36 Last edit by sdlzkw007
yifan1117
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2019/12/22 22:08:07 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
方法有没有问题？
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安平
byron1111
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2019/12/23 20:04:24 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
详细说说具体分析条件为好
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Insp_494cf49a
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2019/12/24 9:20:33 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表:
标样出峰怎么样


我刚开始进标品还是倒峰，后来取消了参比波长就好了。

只是现在样品出峰分离度很不好，都是几个峰连在一起，我看网上说可以调流动相比例，但是不知道应该怎么调整，我刚接触这些，不知道从哪下手，请问您有什么资料推荐吗？或者按您以往的经验来说，这种调整有什么标准吗?感谢您！
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2019/12/24 21:30:58 Last edit by Insp_494cf49a
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2019/12/24 9:21:23 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 yayicuo(v3253952) 发表:
先走下标样，或者在样品中加入标样来看下峰的情况。


嗯嗯，我走了标样，取消了参比波长，峰就正常了。

只是现在样品出峰分离度很差......都是几个峰连在一起，请问关于如何调整流动相比例，您有什么经验吗？我刚接触这些，不知道该从哪下手。
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2019/12/24 21:31:14 Last edit by Insp_494cf49a
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2019/12/24 9:22:23 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 sdlzkw007(sdlzkw007) 发表:
请确认一下是否选择了参比波长；如果是，参比波长是否合适？


我后面取消参比波长，峰就正常了，谢谢您提醒。

但是现在样品出峰分离度很差，请问关于调整流动相比例改善分离度，您有什么经验吗？我刚接触这些，不知道从哪下手。
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2019/12/24 21:31:30 Last edit by Insp_494cf49a
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2019/12/24 9:24:15 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 yifan1117(yifan1117) 发表:
方法有没有问题？


方法是按照文献上的，不过它测的是枸杞叶，我测的是枸杞果，应该差不多吧，再就是柱子不同，但都是C18柱子。

我取消了参比波长后，标品峰就正常了，但是现在样品峰分离度很不好，请问关于调整流动相改善分离度，您有什么经验吗？我刚接触这些，不知道从哪下手。
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2019/12/24 21:31:42 Last edit by Insp_494cf49a
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2019/12/24 9:25:11 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 安平(byron1111) 发表:
详细说说具体分析条件为好
具体条件是：
A-甲醇（上面那三个图用的乙腈）；B-冰乙酸水（1：100）
梯度洗脱：0～8 min，15% ～20%A; 8～18 min，20% ～60% A; 18～25 min，60% A; 25～30 min，60% ～ 80% A; 30 ～ 40 min，80% A; 40 ～50 min，80% ～15% A; 50～55 min，15% A 结束。柱温30 ℃，流速1 mL/min，进样量20 μL。

我取消了参比波长之后峰就正常了，但是进样品后，分离度很不好，都是几个峰连在一起，我看网上说可以改流动相比例提高分离度，那这个比例的调节就是随便调吗？我刚接触色谱，网上也没查到具体的标准，所以想请教一下您，感谢。
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2019/12/24 21:31:58 Last edit by Insp_494cf49a
手机版： 流动相选择问题，麻烦大神指教！感谢！
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