请教大伙一个问题,关于SPE C18脱盐
我的样品是小鼠肝全蛋白,经过胰酶酶切和定量标记后想在上
液质前脱盐。用的是waters的Sep Pak C18脱盐柱,样品和填料比为1:1000。
流程如下:
活化:1、1mL 100%乙腈
2、1mL 50%乙腈/50%水
平衡:0.1% FA,10倍柱体积
上样:样品用FA调至3~4,加入萃取柱中,使其按重力自然流出
清洗:1mL 0.1% FA,洗盐
洗脱:1mL 洗脱液(50%乙腈,0.1% FA),静置2min后,洗脱样品
回收穿过液,清洗液和洗脱液测肽段浓度,用的是thermo家的肽段定量试剂盒。回收效率只有60~70%。请问该如何改进流程?