某制药企业报修，反映使用气相色谱仪按照《中国药典》附录的内标法测定某药物品种时，分析结果重复性不良，超出《中国药典》重复性允许值——2%。询问用户同时开展的其他药物品种，用户反应同样采取内标法定量的重复性结果正常。

气相色谱分析条件：

气相色谱仪： Shimadzu gc-2010Pro AF

色谱柱： Rtx-WAX，30m*0.25mm*0.25um

柱温： 170℃，恒温

分流比： 40：1

进样体积： 1ul，采用AOC-20i自动进样器

检测器： FID， 280℃

进样口： 280℃

故障分析和预判

重复性不良常见的原因为进样器不良、系统（包括进样口和检测器）存在泄漏、色谱柱安装位置不良、气源状态不稳定、环境不稳定或者样品问题。

此外，既然分析重复性的结果与样品的不同有关，那么很可能与样品本身性质或者gc分析系统的特性有关。

现场检查

抵达用户现场后，检查和整理气相色谱进样口和色谱柱，排除泄漏和安装位置不良的问题。考察气源和用户实验室电气和温湿度条件，未见异常。

使用AOC-20i自动进样器连续进样六次FID的标准样品（正己烷中的十二烷和十六烷，100ppm），考察正十六烷的色谱峰面积重复性，RSD为0.7%，再考察正十六烷和正十二烷的峰面积比值的重复性，RSD为0.4%。此时证明系统状态良好。

然后开始进样用户的3个内标标准样品，进样之后经过用户的公式计算，测试数值的RSD大于2%。

用户反映该计算公式，基于药典附录色谱法部分，内容如下：

“重复性：用户评价色谱系统连续进样时响应值的重复性能。采用外标法时，通常取各品种项下的对照品溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0%；采用内标法时，通常配制相当于80%、100%、120%的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，配成3种不同浓度的溶液，分别至少进样2次，计算平均校正因子，其相对标准偏差应不大于2.0%”

实验将用户的3个标准品数据生成标准曲线，如图1所示，发现该标准曲线存在较大的截距。《中国药典》中提到的平均校正因子，即图1种虚线的斜率。如果某物质在某方法下的标准曲线存在较大截距，那么就会发生平均校正因子数值的相对标准偏差较大。

图1 标准曲线示意

问题解决

如果需要解决这个问题，那么就应该尽力减小系统标准曲线的截距。可以有两种方法，或者设法平移校准曲线以缩小截距，或者设法改变校准曲线的斜率。

实际试验中，修改了检测器的氢气和空气流量——对于FID检测器，不同的氢空比会对应不同的分析灵敏度，即标准曲线的斜率。氢气流量由40ml/min降低至32ml/min，空气流量降低至200ml/min。连续多次进样，数据良好。

小结

理论上检出限即标准曲线（外标标准曲线）的浓度轴截距，不同的物质在某个确定分析条件下，必然会有不同的检出限，那么必然会有强度不同的截距。尤其是某些在FID检测器上响应较低的物质。

如果不是用户对标准方法研读和理解错误的话，《中国药典》对内标法重复性评价的要求，不只是对峰面积之比重复性的要求，同时还有对工作曲线截距的要求，可能《中国药典》的内标法重复性评价方法并不完全经得起推敲。

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