1.1 仪器组成

安捷伦高效液相色谱仪由脱气机，输液泵，柱温箱，7725i手动进样器，检测器及系统软件组成。

1.2 操作程序：

1.2.1流动相的准备

将去离子水和有机溶剂分别用0.45um微孔滤膜过滤，除去颗粒性杂质，倒入贮液瓶，超声波脱气15分钟后，将之放置在仪器的试剂架上。

1.2.2开启稳压电源，然后依次开启各组件的电源开关及计算机电源开关，待仪器通过自检后，在计算机 "Windows"程序中，对"在线仪器" 轻击二次，即进入在线工作站应用程序。

1.2.3方法编辑和参数设定

1.2.3.1 建立方法在"方法 & 运行控制" 画面下，展开"方法"菜单,选择 "保存方法" 条目，画面展开后，输入方法文件名， "确定" 确认，即建立了以原程序初始设定参数为条件的方法。

1.2.3.2方法参数条件的编辑展开"方法"菜单，选择"导入方法"，选择欲编辑的方法文件名,使该方法进入当前使用状态。展开"方法"菜单，选择"编辑方法"，轻击鼠标，在需要编辑的条目前面框内划"×"。"确定"确认后，即进入分项具体编辑画面。

1.2.3.3在"方法信息" 画面下，输入方法提要、适用对象、柱子型号、编辑日期及操作人等内容，"确定" 确认。

1.2.3.4在泵参数 “泵流速、溶剂％、压力”画面下，设定流速、各通道溶剂比率、压力（高限和低限）等参数。梯度洗脱时，在梯度时间表（time table）内，设定起始时间和起始溶剂比率、终止时间和终止溶剂比率、流速等。

1.2.3.5在柱温"加热 "画面下，设定柱箱温度。

1.2.3.6 在检测器参数 "UV 信号" 画面下,设定检测波长、信号采集时间，最小峰宽，信号响应值，基线自动平衡参数等条目， "确认” 确认。

1.2.3.7 在“详细参数”画面下，选"添加方法条"条目,设定信号采集、积分的详细参数，以及信号通道开启时间、终止时间和延长时间。

1.2.3.8在 "编辑积分事件" 画面下，编辑积分参数。如负峰积分、开启和终止时间、溶剂峰、肩峰处理时间、基线选择、最小峰宽、识峰域值等。

1.2.3.9 在 “详细报告”项下，设定报告格式。如在 “类型”中选择"简单报告"，则打印出色谱图和简要的数据报告。选"完整报告"，可打印出色谱峰和柱性能的完整报告。在 "定量方式"中选择计算方法(百分比法、内标法、外标法等）、数据类别（峰高或面积）、峰确认方法（保留时间或信号识别）等。在 "色谱法" 项下选择色谱图大小、式样及峰标注内容（化合物名或保留时间）等，"确定" 确认.

1.2.3.10 方法的存贮展开 "方法" 菜单，选择 "保存方法" 将上述编辑的方法存盘。

1.2.3.11 内存方法的调用对于已经编辑并存盘的方法，开机进入应用程序后，在方法＆运行控制" 画面下，展开 "文件" 菜单，选择 "导入" 项，输入方法名，"确定"确认，使该方法进入当前使用状态。已进入当前状态的方法，若需要修改参数，可展开 "仪器" 菜单行。

1.2.5 样品测定与数据报告

1.2.5.1 启动泵（按泵的 [启动/关闭] 键）和检测器（按检测器的[启动/关闭] 键）。

1.2.5.2 待基线平稳，用进样器手动进样。

1.2.5.3 测定完毕，从"视图" 菜单中，选择 "数据分析" 条目，进入数据分析画面，展开 "File" 菜单。选择 "导入信号"，可以调用任何一个样品数据文件，展开色谱图。可选择 “积分”，进行手动积分处理；也可选择 "校准" 建立标准曲线；也可选择"报告"，打印处理后的数据报告。

1.2.6关机

1.2.6.1样品测定完毕，在 “仪器” 菜单下设定各通道溶剂比例，用甲醇对色谱柱进行清洗。

1.2.6.2 柱子冲洗完毕后，轻击系统“关闭”键，停止各组件的运行，关闭主操作界面，最后关闭仪器各组件的电源开关。

1.2.7 每次分析样品之前必须用已知含量的参照样对仪器进行校验,当实测与标值的相对偏差<0.3%时可进行样品测试,否则必须对系统进行调整,使其达到规定要求。

1.0 注意事项及维护

1.1 配置不间断电源及稳压电源，以免电源突开或停时引起烧坏。

1.2 如不做分离、检测，应将紫外检测器关闭，以延长紫外光源寿命。

1.3 全部测定完毕后，用适当的溶剂冲洗泵、色谱柱和检测器。

1.4 按国家技术监督局应定期检定，应符合规定。

1.5 操作之前检查仪器各部件是否运作正常、管路为无死体积连结，流路中无堵塞与漏液、气泡。

1.6 高纯度的试剂配制流动相，配制好流动相应用0.45um滤膜过滤。

1.7 压力表无压力波动，不稳定、压力过高时，要停机进行检查。

1.8 仪器要放在远离磁场、温度0～45℃，湿度0～80%地方。

1.9 上色谱柱时，不要用力过大，以不漏液为准。