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液相色谱（LC）

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主题：【原创】分析方法开发的小心得

浏览0 回复4 电梯直达

Insm_603a714c

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发表于：2024/05/19 00:35:19 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

16年开始参加工作，一致在药企做QC,HPLC GC AAS UV IR能用到的都挺熟悉
去年被裁，碰巧安捷伦仪器工程师介绍了一个初创公司
遂入职，入行工艺分析研究，主要工作内容是医药中间体的分析方法开发和样品检测
如何快速的进行HPLC方法开发
HPLC标准梯度A0.1%磷酸B乙腈 5%B-95%B标准梯度，结合色谱柱规格,确定梯度变化速率和流速
如100*2.1mm的色谱柱，梯度变化为10分钟，流速为0.5ml/min

时间	B%
0	5
0.5	5
10.5	95
11.5	95
12	5
13.5	5

这样就得到一个通用方法，然后根据峰的分离情况，目标化合物的结构，优化梯度，筛选色谱柱，选择流动相等
这时，峰在保留时间越小极性越大，保留时间0.5-1min，出峰靠前，说明化合物极性极大，需要增加流动相极性（增加水相比例，但常规C18水相比例最高为95%），增加色谱柱极性（换极性键合c18柱，如AQ-C18,T3等）
保留时间12-13.5说明化合物极性极小，出峰靠后，说明化合物极性极大，需要降低流动相极性，（增加有机相比例或者95%B的时间或者增加有机相洗脱强度，如将95%B的保持时间增加到3min），降低色谱柱非极性（换保留更弱的C18或C8 C4等）
两个或者多个峰都出在中间，分离不佳，可以降低有机相变化速率和初始有机相比例来优化，都无效果就需要换柱子和流动相了

附件：

实用高效液相色谱法的建立(第2版).PDF(未验证)

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2024/5/20 2:47:55 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

"分析方法开发的小心得"！这是前进中经验的积累。

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sunny9898

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2024/5/21 9:49:48 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

谢谢楼主分享，非常实用的总结

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Insm_603a714c

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2024/6/10 0:44:23 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

2，如何优化方法
在通用方法上改边梯度无法分离的化合物，看下化合物结构，有酸碱性基团的可以用marvinsketch 算下logD，两个化合物logD，大于-1且相差较大时，使用该pH分离会非常容易；也可直接改变水相pH 分别为 5 7 9（注意色谱柱耐受范围），观察分离情况
都为中性化合物，需要筛选色谱柱，一般筛C18 PFP 苯基己基柱即可
也可参考其他各公司的说明书来筛pH和色谱柱

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