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主题：【求助】在线等待救援：梯度出现倒峰和基线下滑至-2000多mAU

浏览0 回复11 电梯直达
liujieqing20011
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发表于：2007/11/18 19:15:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用乙睛：0.8%乙酸水梯度洗脱，206nm，1ml/min，谱图如附件。请问出现这个现象的原因是什么？亟待回答！！！谢谢！！！！
谱图
附件：
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2007/11/18 19:43:00 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
基线向下漂移。信号衰减可以调节一下看看。现在人少，你再耐心等待一会。
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xiaomity
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2007/11/18 21:25:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
属于正常现象,要等待它回到基线
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liujieqing20011
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2007/11/18 22:08:00 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xiaomity 发表:
属于正常现象,要等待它回到基线


进样前没有这个现象啊，就是梯度了财有的，等它回到基线都跑完了。
我试试把有机相中也加乙酸。谢谢你们！
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wuyinghao
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2007/11/18 22:10:00 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你选择了206nm作为检测波长,低波长的地方由于你流动相中乙睛比例的变化必然导致吸收的变化,乙睛在210以下有吸收.为了消除这个现象,建议在可能的情况下,选择260nm以上的波长为检测波长.
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liujieqing20011
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2007/11/18 22:10:00 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 dindin 发表:
是因为流动相中乙酸含量随梯度逐渐减小所致,可以尝试在水相和有机相中加相同比例的乙酸,基线下滑会有所改善.

请教一下2楼dindin，我用这个梯度的时候跑基线怎么都跑不平，都在5左右波动，这是什么原因呢？谢谢
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liujieqing20011
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2007/11/18 22:12:00 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 wuyinghao 发表:
你选择了206nm作为检测波长,低波长的地方由于你流动相中乙睛比例的变化必然导致吸收的变化,乙睛在210以下有吸收.为了消除这个现象,建议在可能的情况下,选择260nm以上的波长为检测波长.

可我要测定皂苷的含量，皂苷在260nm没有吸收，只在210以内才有。有什么好的建议么？
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wuyinghao
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2007/11/18 22:22:00 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
建议你将色谱条件做以下2种中的一种改动:
1. 将乙酸改为磷酸.
2. 采用下列流动相:CH3CN-50mmol/L KH2P04·H20(20:80)，二元梯度洗脱;流速:1. 0 mL/min;UV检测器，检测波长203 nm。梯度比例可以按实际情况设置,原则是能将所有组分在较短时间完全分开并洗脱出来.
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liujieqing20011
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2007/11/18 22:37:00 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 wuyinghao 发表:
建议你将色谱条件做以下2种中的一种改动:
1. 将乙酸改为磷酸.
2. 采用下列流动相:CH3CN-50mmol/L KH2P04·H20(20:80)，二元梯度洗脱;流速:1. 0 mL/min;UV检测器，检测波长203 nm。梯度比例可以按实际情况设置,原则是能将所有组分在较短时间完全分开并洗脱出来.


您说的20：80和二元梯度我不太明白，是不是可以用等度20：80比例或者用梯度洗脱呢 ?谢谢指点！
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wubaicang2003
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2007/11/19 8:51:00 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xiaomity 发表:
属于正常现象,要等待它回到基线，只要系统不漏液，做梯度洗脱有时基线就是难稳
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yingxk
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2009/12/20 10:32:19 11楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
实验 的室内环境变化，，，关闭空调又不行，调节空调方向，，，最好尽量做至室 温恒温，具体温度波动小于多少度，我没 有数据，你可以试试排除
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