主题：【分享】ELISA实验室规范化操作流程

前处理
1．匀浆样本：
取一定量（约100-150g）的样本进行匀浆，匀浆样本以无颗粒状为为佳。样本匀浆好以后再利用称样勺搅拌样本，以充分混合不同个体的样本，达到均质的效果。
2．称量样本：
利用0.01g当量的电子天平称量相应的样本重量，误差尽量控制在±0.02g,以提高结果的准确度。样本直接称取到50ml离心管中。称量的样本应尽量称取匀浆效果比较好的样品。
3．加入提取液：
在相应的样本中加入对应的提取溶剂，溶剂的体积在条件允许范围内尽量精确。
4．提取或萃取：
    加入相应的提取溶剂以后，拧紧离心管盖，利用涡旋仪充分振荡样品，以样本与提取液充分混合为准。具体时间可参考说明书所提供的方法时间要求。
5．离心：
把处理好的样品对称放置在离心机中，离心时间一般设为10min，离心速度一般设为3500rpm/min。如果样品离心效果不佳则可以加大离心力或延长离心时间再次离心。
6．移取液体：
利用加样枪移取对应的的溶剂液体至另一个容器中；如果需要吹干浓缩的样品，则移取到干净干燥的玻璃管中；如果是取下层进行分析的样品则移取全部上层液体，利用下层进行分析。移取液体的时候请注意避免移取到不相关的液体层，以免造成污染。
7．浓缩吹干：
先利用甲醇把氮吹仪的针头进行润洗，具体方法是先打开空气压缩机的开头，先通以少量气流，把装有甲醇的容量浸泡针头前端，浸泡时间约1-2s即可。润洗针头后，把装有样品的玻璃管放在下面水浴锅的相对应的固定夹子上，再打开气流阀门，以能感觉到气流声音为准，再缓慢把针头伸到液面上方，以吹动液面为限，在浓缩吹干过程中应不断调整针头的高度，以节省吹干时间。吹干的样品以没有液体流动的判定依据，亦可在吹干后再吹大约2-3min左右。严禁在没有吹干的情况下就取下样品进行下一步操作。
8．复溶：
加入相应的除杂溶剂（正已烷），再加入对应的复溶工作液后，利用涡旋仪振荡溶解，此步骤时间不宜过长，大约10s左右即可。
样本分析
1．回温平衡：
  在加样之前约半小时左右，把试剂盒从冰箱中取出，放置在室温下进行平衡，平衡到用手握住试剂瓶感觉到不凉为止。如果时间匆忙的话也可以利用手握住试剂瓶进行快速回温。
2．加样：
取出相应数量的微孔板放置在板架上，然后再对板孔进行编号，再对需要稀释的抗体或酶标记物进行稀释。在板孔的前六个孔内分别加入标准品1-6，然后在剩下的板孔内加入样品分析液。然后再在每孔内加入其余需要加入的液体。盖上盖板膜以后小幅度振荡，然后放置在相应的环境中进行反应。如是25℃环境反应，则可放置在空调房内进行反应，有25℃恒温培养箱更好；如果是37℃环境下反应，则必须放置在37℃恒温培养箱里进行反应;如果是4℃环境下反应，则必须放置在2-8度冰箱里进行培养。
3．反应时间：
  尽量把时间控制在需要的反应时间，如果时间比较紧迫的话也可以把时间稍微延长几分钟，但不宜太长。显色时间可根据颜色深浅进行调整。
3．洗板：
把板内液体甩干，加入稀释好的洗液250ul/孔，静置10s或稍作振荡后甩掉孔内液体，再次加入洗液，以此重复3-4遍，洗完以后利用吸水纸把孔内液体充分拍干后进行下一步操作，如果孔内有气泡，则利用干净的枪头刺破。
4. 结束实验:
  把加样枪全部调到最大量程,试剂盒放入冰箱,试管及离心管进行清洗,关闭不用的仪器.