主题:【原创】对于梯度洗脱的一点总结

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speleers
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梯度洗脱

对于组分复杂的样品,采用一种色谱体系,很难得到理想的分离结果。要么分离时间太长,要么分离度太差。

液相色谱中采用梯度洗脱,目的:缩短的时间;提高分离效果。
梯度洗脱:流动相由几种不同极性的溶剂组成,通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性,使每个流出的组分都有合适的容量因子k',并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。

梯度洗脱特点:
提高柱效
改善检测器的灵敏度
当样品中的一个峰的k'值和最后一个峰的k'值相差几十倍至几百倍时,使用梯度洗脱效果特别好。
梯度洗脱中为保证流速的稳定,必须使用恒流泵,否则难获重复结果。
梯度洗脱常用一个弱极性的溶剂A和一个强极性的溶剂B。

梯度范围:指流动相中强溶剂分别在起始液和终止液中的浓度。
调节梯度范围对得到最佳的梯度分离起重要作用。
最佳梯度范围:第一个峰处分时间大约为2倍的t0,梯度结束时把最后一个峰洗脱出来。

梯度洗脱的形式
线形梯度:在梯度洗脱时,流动相强度的变化梯度时间成线性比例。在一定时间内流动相强度越大,直线斜率越大。
指数梯度:在梯度洗脱时,流动相强度岁梯度时间变化称指数关系 。
凹形:梯度起始阶段强度变化缓慢,随时间增加强度变化加快。
凸形:起始阶段梯度速度变化快,终止阶段梯度速度变化慢。
折线形:
选择适当的A,B溶剂
强度:A溶剂为低强度;
   B溶剂为高强度,B溶剂的强度应能够在梯度过程中使所有欲测谱带都能被洗脱,并使各谱带的k’值在2-10之间。

初步分离

  选择好A、B两种溶剂,先按中等强度进行配比,在此恒定强度下进行初步分离。A、B混合溶剂强度应使所有谱带的k’值在1-10之间。

梯度形式选择
经过初步分离,一般可能得到3种分离色谱图:
① 前半部峰重叠,后半部峰分离度过大,保留时间太长;
  可选择线形梯度,或凹形梯度。
② 前半部分离良好,后半部峰重叠;
  可选择凸形梯度。
③ 前后两部分分离良好,中间部分峰重叠。
  可选择折线梯度。

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这种梯度洗脱,是不是因为不同的物质在不同的流动相中的保留时间不一样,在设置了梯度洗脱之后,跑出来的峰的时间就可以达到较短,分离效果明显呢?
cxh1943
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ximeng2007
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只要液相色谱仪配有梯度洗脱装置都可以进行梯度洗脱,梯度洗脱的原理是一样的,即通过改变流动相中各溶剂组成的比例来改变流动相的极性,使每个流出的组分都有合适的容量因子,并使样品中的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。
对一未知样品进行分析分离时,首先要进行摸索以确定适合用等度洗脱还是梯度洗脱;对于复杂的分析样品采用梯度洗脱能够缩短分离时间,实现很好的分离。
pharm2002bcc
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原文由 speleers 发表:
梯度洗脱

对于组分复杂的样品,采用一种色谱体系,很难得到理想的分离结果。要么分离时间太长,要么分离度太差。

液相色谱中采用梯度洗脱,目的:缩短的时间;提高分离效果。
梯度洗脱:流动相由几种不同极性的溶剂组成,通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性,使每个流出的组分都有合适的容量因子k',并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。

梯度洗脱特点:
提高柱效
改善检测器的灵敏度
当样品中的一个峰的k'值和最后一个峰的k'值相差几十倍至几百倍时,使用梯度洗脱效果特别好。
梯度洗脱中为保证流速的稳定,必须使用恒流泵,否则难获重复结果。
梯度洗脱常用一个弱极性的溶剂A和一个强极性的溶剂B。

梯度范围:指流动相中强溶剂分别在起始液和终止液中的浓度。
调节梯度范围对得到最佳的梯度分离起重要作用。
最佳梯度范围:第一个峰处分时间大约为2倍的t0,梯度结束时把最后一个峰洗脱出来。

梯度洗脱的形式
线形梯度:在梯度洗脱时,流动相强度的变化梯度时间成线性比例。在一定时间内流动相强度越大,直线斜率越大。
指数梯度:在梯度洗脱时,流动相强度岁梯度时间变化称指数关系 。
凹形:梯度起始阶段强度变化缓慢,随时间增加强度变化加快。
凸形:起始阶段梯度速度变化快,终止阶段梯度速度变化慢。
折线形:
选择适当的A,B溶剂
强度:A溶剂为低强度;
   B溶剂为高强度,B溶剂的强度应能够在梯度过程中使所有欲测谱带都能被洗脱,并使各谱带的k’值在2-10之间。

初步分离

  选择好A、B两种溶剂,先按中等强度进行配比,在此恒定强度下进行初步分离。A、B混合溶剂强度应使所有谱带的k’值在1-10之间。

梯度形式选择
经过初步分离,一般可能得到3种分离色谱图:
① 前半部峰重叠,后半部峰分离度过大,保留时间太长;
  可选择线形梯度,或凹形梯度。
② 前半部分离良好,后半部峰重叠;
  可选择凸形梯度。
③ 前后两部分分离良好,中间部分峰重叠。
  可选择折线梯度。



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