选用比C18链还要更长的烷基链做固定相前面讨论过有些极性强的物质,即便在有机相比例小于5%的流动相下,在C18柱上也没有分离所需要的足够保留。通过增强固定相的疏水性来增加保留能力,对极性物质来说,也是有效的,因为即便是极性物质也存在一定的疏水部位,极性物质的疏水部位可以和固定相发生疏水相互作用而产生保留。所以,C27到C30的烷基作固定相,比普通高密键合的C18固定相和极性基团嵌入的C18固定相,无论分析非极性和极性物质,一般其保留能力都更强,而且pH稳定性也好很多。
意想不到的是,超长链烷基固定相在高水流动相下,抗相塌陷的能力也比C18固定相强,这与固定相的形态随温度的变化有关。C18链上起主要作用的C18H38基团的熔点是29-30摄氏度,而C30H62的熔点是68-69摄氏度。C30链在普通
液相的30-40度操作温度下呈固态,因而不容易在高水流动相下发生移动和相塌陷。C18链处于液态状态,这种情况下易移动和发生相塌陷。上面是假设固定相类似处于液态烃的状态,但固态的核磁共振对C30固定相测试的结果表明:随着温度的增加,C30链的可移动性也会增加,会增加纽结和弯曲的程度。
图六是用C30柱在100%水缓冲盐流动相测定各类核苷酸的图谱,各个峰形非常的对称,并长时间稳定不发生保留能力逐步损失的现象;而用C18柱在同样情况下测定,35个小时后保留能力就完全丧失了。
选用孔径更大的硅胶做填料基质孔径变大,按照LapLace-Young方程ΔP=4γCOSθ/d,d变大,ΔP就相应变小,高水流动相进入孔内所需要的压力就小了,再加上键合相键合得不那么致密,就不容易发生相塌陷现象。但是孔径大了,硅胶的比表面积就小了,保留能力就要大打折扣了。所以这种方法用得不多。