主题：【第二届网络原创参赛作品】我的一次分析方法建立全过程

胺化物分析条件的确定


1、流动相的选择
a、流动相A：1.74g/L无水K2HPO4（H3PO4调pH7.0）；流动相B：甲醇-乙腈（1：1）。
b、流动相A：Buffer：Solvent（30：70）；流动相B：Buffer：Solvent（5：95）（buffer：取2.0ml三乙胺于950ml水中，用冰乙酸-  水（5：95）调pH7.5用水稀释至1L，Solvent：乙腈-甲醇（4：6））
    在实际检测中发现用a方法时，二萘甲基甲胺未被检出，改动a中流动相B的甲醇与乙腈的比例，改动流动相A为N2HPO4溶液，但是结果还是二萘甲基甲胺不会出峰（也有可能出峰时间太长，判定不予采用）。用b方法时，则能清晰的显示出各个杂质，但是在分离度上遇到了问题，我对b中流动相A的比例进行了调整。在流动相A的确立共进行了3次比例的调整。（1）Buffer：Solvent（30：70）；（2）Buffer：Solvent（40： 60）；（3）Buffer：Solvent（50：50）最终发现（2）就能达到良好的分离效果。Buffer：Solvent（40： 60）。最终采确定b方法，流动相A：Buffer：Solvent（40：60）；流动相B：Buffer：Solvent（5：95），buffer：取2.0ml三乙胺于950ml水中，用冰乙酸-水（5：95）调pH7.5用水稀释至1L，Solvent：乙腈-甲醇（4：6）。

2、在柱子的选择上都采用了WATERS的柱子。（1）Ineresil ODS-2 3.0*150mm 5u；（2）Ineresil ODS-3V 4.6*250 5u。但是在用    （2）时发现出现右旋体，与我们所要分析的杂质无关，且不能达到良好的分离效果。采用：（1）Ineresil ODS-2 3.0*150mm
5um。
3、溶液pH的的调整。 我试过调pH6.5，7.0，7.5，结果没有任何影响，考虑胺化物碱是碱性的，于是采用pH7.5。
4、在柱温和流速上进行了微调，影响不大，最终确定最适宜的柱温和流速分别为：40℃和0.8ml/min。
5、为了缩短分析时间，达到更好的分离效果，我们又对梯度洗脱的方式进行了优化，通过图谱的对比和实际检验，最终确定了按以下方式梯度洗脱：

时间T（min）    流动相B(%)
  0               100
  8               100
25               0
30               0
30.1               100
35               100

6、最后，在检验过程中发现，溶剂对供试品溶液的稳定又影响，于是我们试了以下几中溶剂：a，ACN-WATER(1:1);b，MEOH;c，ACN .最后发现用ACN做溶剂各杂质及主成分稳定。采用ACN做溶剂.