主题：【第二届原创大赛】顶空气相色谱法测定中成药中有机残留物

原文由 土老冒豆豆(土老冒豆豆) 发表:

原文由 symmacros(jimzhu) 发表:
请问SFDA是什么机构？

是国家食品药品监督管理局的简称。
仿照美国FDA，注意，是FDA，不是FBI

整天和食品打交道，美国FDA几乎每天到能碰到。那么S是State吧？

原文由 symmacros(jimzhu) 发表:

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原文由 symmacros(jimzhu) 发表:
请问SFDA是什么机构？

是国家食品药品监督管理局的简称。
仿照美国FDA，注意，是FDA，不是FBI

整天和食品打交道，美国FDA几乎每天到能碰到。那么S是State吧？

是滴，全称是State Food and Drug Administration

继续昨天没有说完滴

由于我做实验的时候自己的实验室没有别人做过，所以所有的资料都是自己重头找的，当然也是那时候开始频繁的来到仪器信息网求助。得到了气相版月姐姐的很多帮助。呵呵，好下面我就分享一下做这方面实验室的一些小规范，都是我到处询问及查找的，如有不足之处望版友们指出
1.对于有机残留溶剂检测时检测器的选择：
一般选用FID检测器，对含卤素的有机溶剂如氯仿等，采用ECD检测器可得到更高的灵敏度。
2.对于气相色谱柱的选择
按照相似相溶的原理选择色谱柱。毛细管柱有极性柱、非极性柱、弱极性柱和中等极性柱。填充柱有高分子多孔小球或涂渍适宜固定液的填充柱。
我在做的过程也试过弱极性柱：HP-5，但是性质较为相似的对二甲苯和间二甲苯不能分离


现在所看到的1号峰就是对二甲苯和间二甲苯，2号峰是邻二甲苯
换了极性柱之后，分离度明显变好


6号峰时对二甲苯，7号峰是间二甲苯，8号峰是邻二甲苯

3.对于一个新手来说，用什么溶解标准样品真的是件挠头的事情，那么又应该怎么选择呢？
再还没有查找资料之前我就已经开始做了一部分，但是随着我查阅资料的增多，我发现了一个不成文的规律
顶空进样方法通常以水为溶剂，对于非水溶性的药物，可采用DMF、DMSO或其他适宜溶剂。溶液直接进样方法用水或合适的溶剂溶解样品。
水是首选溶剂，特别是顶空进样系统。
因为水中不含有机溶剂，故干扰较少，且在FID检测器上，以水为溶剂时，各残留溶剂的灵敏度最高。当药物不溶于水时，可加入适当的酸或碱以增加药物的溶解度，最好选用不挥发的酸或碱。以DMSO等为溶剂时，可加入一定量的水以增加检测的灵敏度，或用盐析的方法增加灵敏度。测定含氮的碱性溶剂时，供试品溶液应不呈酸性，以免被测物与酸反应后不易汽化。

4.关于取样量和样品瓶体积的问题
因为我们实验室有两种规格的顶空瓶，所以我两种都有试过，结果是这样子滴
由于相比(Vg/Vs)越小，灵敏度越大，我首先选择取样量为0.5 g，溶解于10mL溶剂中，样品瓶体积为20mL，取样量越大，基质效应越明显，尤其沸点高的有机残留溶剂如二乙烯苯回收率越低。于是，我就减小了取样量，这样二乙烯苯的回收率才合格

5.顶空进样法还要对顶空温度和顶空时间进行选择

按照常理大家都会觉得，顶空温度越高，顶空平衡时间越长，那么效果就应该越好，但是事实上并不是如此的
首先说说顶空的温度：
顶空温度应根据溶解供试品溶剂的特性及供试品中残留溶剂的沸点选择。以水为溶剂及测定低沸点残留溶剂时，顶空温度不宜超过85℃；测定沸点较高的残留溶剂时，通常选择较高的顶空温度；但此时应兼顾供试品的热分解特性，尽量避免供试品产生的挥发性热分解产物干扰测定结果。以DMSO为溶剂时，顶空温度不宜超过115℃。

话是这么说滴，但是也要根据自己的所测的物质决定，由于我测定的物质中有二乙烯苯，其沸点是198℃，经过考察，我选用了90℃的顶空温度。

再来说说顶空的时间：
顶空时间是要确保供试品溶液的气-液两相达到平衡，一般通过测定顶空时间与顶空气体浓度的浓度—时间曲线来确定。顶空时间不宜过长，一般为30～45分钟，如果超过60min，可能引起顶空瓶的气密性变差,导致定量的准确性降低。如果平衡时间选择多短，就不能保证气-液两相达到平衡。

最后分享一下我查到的一个关于残留溶剂检测方法验证的内容。希望对广大新手能有用处（这部分非我原创，纯属分享，谢谢）
　3.1  系统适用性试验
　　柱效：用被测物的色谱峰计算，填充柱法的理论板数应大于1000，毛细管色谱柱的理论板数应大于5000。
　　分离度：色谱图中被测物色谱峰与其相邻色谱峰的分离度应大于1.5。
　　重复性：以内标法测定时，对照品溶液连续进样5次，所得被测物与内标物峰面积之比的相对标准偏差(RSD)应不大于5%；以外标法测定时，所得被测物峰面积的相对标准偏差(RSD)应不大于10%。
　　3.2  准确度
　　在规定的范围内，至少9个测定结果。设计三个不同的浓度进行测定，计算回收率和相对标准偏差，含量测定的回收率应大于98%。
　　进行回收率试验时，由于采用顶空进样系统，供试品与对照品处于不完全相同的基质中，此时应考虑气-液平衡过程中的基质效应。标准加入法可以消除供试品溶液基质与对照品溶液基质不同所致的基质效应的影响，故通常采用标准加入法验证定量方法的准确性。当标准加入法与其它定量方法的结果不一致时，应以标准加入法的结果为准。
　　标准加入法为精密称（量）取被测定的残留溶剂对照品适量，配制成适当浓度的对照品溶液，取一定量精密加入到供试品溶液中，根据外标法或内标法测定残留留剂的含量，再扣除加入的对照品溶液的含量，即得供试液溶液中残留溶剂的含量；或按下式计算残留溶剂的量。Cx=ΔCx/[（Ais/Ax）-1]，式中Cx为供试品中组分X的浓度；Ax为供试品中组分X的色谱峰面积；ΔCx为所加入的已知浓度的被测组分对照品；Ais为加入对照品后组分X的色谱峰面积。
　　3.3  专属性
　　对各种残留溶剂定位和进行混合溶剂的分离度试验，并附代表性图谱。
　　供试品中的未知杂质或其挥发性热降解产物易对残留溶剂的测定产生干扰。如果未知杂质或其挥发性热降解产物与被测物的保留值相同（共出峰），或热降解产物与被测物的结构相同（如甲氧基热裂解产生甲醇）时，应通过试验排除干扰。对第一类干扰，通常采用在另一种极性相反的色谱柱系统中对相同样品进行测定，比较不同色谱系统的测定结果的方法。如二者结果一致，则可以排除测定中有共出峰的干扰；如二者结果不一致，则表明测定中有共出峰的干扰。对第二类干扰，通常要通过测定已知不含该溶剂的对照样品来加以判断。
　　3.4  其它
　　可根据是限度检查还是定量测定选择具体的验证内容。
　　精密度：重复性和重现性，在规定范围内，至少9个测定结果。设计三个不同的浓度进行测定。一般保留时间的RSD〈1%，峰面积的RSD〈5%。
　　线性：至少制备5个浓度，R=0.99。附回归方程、相关系数和线性图。
　　检测限和定量限：检测限为信噪比3：1或2：1时相应浓度或注入仪器的量。定量测定时需验证定量限，其限度为信噪比10：1时相应浓度或注入仪器的量。同时说明测试的过程和结果，并附图谱。

再次感谢关注本贴的版友及专家

平时很少接触气相，原来这东西理论知识是如此丰富，学习之。。

我看完了，写的非常好，那个铝盖在照相的时候使用微距，效果会更清楚

再简单介绍一下，关于有机残留物检测的一些问题。由于我们在开发这种中成药在进行药物纯化的过程中使用了大孔树脂，但由于大孔树脂本身含有一定量的有机残留物，影响了药品和食品的安全性因此SFDA规定必须对其残留物进行检测，并对其限度进行了规定：正己烷为290ppm，苯为2ppm，正癸烷为5000ppm，甲苯为890ppm，二甲苯(对、间、邻三种异构体的混合物)为2170ppm，苯乙烯，二乙烯苯参照国家食品药品监督管理局药品评审中心的一般要求为20ppm。

原文由 独行的智慧(tanghuizhi01) 发表:
挺好的

仪器挺贵

呵呵，关于弟弟私下问我的问题，前面已经解答，在做顶空的时候，最好用DMF或者DMSO，所以二硫化碳和甲醇不太好，我觉得