主题:【在线讲座33期】液相色谱柱使用疑难问题解析(答疑结束)

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plexu
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原文由 wengjc0916(wengdudu) 发表:
plexu您好!我有以下问题想请教,
 1、请问:相对于气相色谱液相的优势在哪里?
  2、请问:做防腐剂分析时,流动相加入乙酸铵才可以出峰,原理在那里?


抱歉,你的问题差点遗漏回答了!
液相气相相比的优势有很多,我认为主要在于应用范围更广。气相只限于容易气化的低分子量物质的分析测定,对象大部分是基础化工原材料;而任何能溶解于某溶剂的物质都能用液相分析,适用对象是分子量从几十到几万的广大范围。在制药、化工、环保、食品和刑侦等诸多重要领域,液相都已成为主导的分析分离工具。也有两者都能应用的交叉情况,但液相的制样更简单。液相色谱的出现克服了气相色谱不能直接用于难挥发、热不稳定及高分子化合物的弱点。

对第二个问题,我因为没有具体做过防腐剂分析,在回答之前,能告诉我测定什么防腐剂吗?是苯甲酸一类吗?你用的是什么柱子呢?流动相又是什么?
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2010/7/29 9:45:50 Last edit by plexu
dongyuzhang520
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plexu您好!我有以下问题想请教,

我们在用的氨基柱时,有时候峰型突然变宽,有拖尾,用一段时间就又好了,不明白是什么原因造成的,如果要再生氨基柱的时候应该怎么做呢?是像您先前回答的问题中提到的,用一定比例的氨水冲洗吗?

氨基柱可以直接用纯水冲洗吗?记得当时买的氨基柱那个使用说明书上说不能用纯水冲?是这样的吗?如果可以冲的话,一般冲多久?

谢谢!
zhwx0406
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plexu您好!我有以下问题想请教,
 请问:1、采用国标用C18柱测定辣椒精辣度,将辣椒精中添加吐温系列乳化剂做成水溶辣椒精,请问乳化剂对C18柱是否有影响?
        2、公司按照国标测定辣椒红色素中苏丹红含量,标品分离很好,峰也不错,但是辣椒红色素由于跟苏丹红性质很相似,且颜色较深,分离效果很差,收得率很低,测定结果偏差很大。该如何处理样品?色素是否会降低柱效?
谢谢!!
老多_小多
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plexu您好!我有以下问题想请教:

通常我们在分析天然药物成分的时候结构复杂,无法考察组分的PKa值,哪我们如何去选择最合适的流动相或者是拖尾该怎么改善呢?
纸鸢
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原文由 plexu(plexu) 发表:
原文由 wkfei1128(wkfei1128) 发表:
感谢月旭在本版面做论坛线上讲座!
您好!我有以下问题想请教:
1、对于一根常用的C18住,拿到一根新柱的时候应该怎样进行活化及维护?为什么要这样做?希望能够详细些,非常感激。
2、测定多肽,一般采用什么柱子?流动相是乙腈和水,还有微量的TFA。特别是像类似三肽的短肽,应该怎么选择柱子?


新柱活化,实际上是一个平衡的过程,除了用流动相平衡外,有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡,特别是测定分子量比较高的多肽,尤其重要。因为分子量高的物质分子,扩散速度慢,平衡所需时间也相应较长。具体平衡方式也很简单,多进几次样品,直到峰面积和保留时间稳定,再进行正式进样测定。
如果要加快平衡时间,把前面用来平衡的进样样品浓度加大,或者不等洗脱完成,连续进样多针。用待测物对新柱平衡,目的是将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和掉。

分子量不高的多肽一般选用常规C18柱就能测定,也有用离子交换柱、水性C18柱和Hilic亲水作用柱的。


非常感谢plexu的回答,还有一点不明白,就是记得以前拿到C18柱,会用甲醇从小流量到大流量慢慢活化,这样做的目的是什么呢?是先用溶剂活化吗?然后再用样品?
还有测定短肽总是冲出来,该怎么解决呢?就是和溶剂峰出在一起,或者出在溶剂峰之前。
纸鸢
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plexu您好!我有以下问题想请教:
C18柱如果之前曾有些天一直保存在酸性环境中,会对柱子有什么损坏吗?ph在2左右。
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2010/7/29 12:09:25 Last edit by wkfei1128
纸鸢
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plexu您好!我有以下问题想请教:
色谱柱的安装有什么技巧吗?只要保证不漏就行了吗?
还有所谓的死体积怎么测定呢?

测定多肽样品时,十几肽或者二十几肽时,有时峰前延的比较厉害,有时峰拖尾比较厉害,这是什么原因呢?是样品的问题还是柱子的问题?
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2010/7/29 12:19:42 Last edit by wkfei1128
yongzhbenq
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原文由 zhwx0406(zhwx0406) 发表:
plexu您好!我有以下问题想请教,
 请问:1、采用国标用C18柱测定辣椒精辣度,将辣椒精中添加吐温系列乳化剂做成水溶辣椒精,请问乳化剂对C18柱是否有影响?
        2、公司按照国标测定辣椒红色素中苏丹红含量,标品分离很好,峰也不错,但是辣椒红色素由于跟苏丹红性质很相似,且颜色较深,分离效果很差,收得率很低,测定结果偏差很大。该如何处理样品?色素是否会降低柱效?
谢谢!!

你这里首先不能考虑对色谱柱有没有影响,而是你的这个方法学有没有问题
不知道您那边的加样回收率做的情况如何?如果回收率偏差很大,说明样品前处理有点问题,可能需要用到液液萃取或者固相萃取
yongzhbenq
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原文由 wkfei1128(wkfei1128) 发表:
plexu您好!我有以下问题想请教:
C18柱如果之前曾有些天一直保存在酸性环境中,会对柱子有什么损坏吗?ph在2左右。

最好别长期保存在强酸性环境中喽
最好是选择那种耐酸性的C18柱子比较好,那种柱子在酸性环境下测定相对稳定点
老多_小多
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原文由 wkfei1128(wkfei1128) 发表:
plexu您好!我有以下问题想请教:
C18柱如果之前曾有些天一直保存在酸性环境中,会对柱子有什么损坏吗?ph在2左右。

2接近极限了,肯定是相当的不好
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