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原文由 小卢(luxw) 发表:原文由 plexu(plexu) 发表:原文由 小卢(luxw) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教：
第三个问题：
预柱或保护柱用还是不用的问题！
原来分析中药品种时，我一直都是用保护柱。但来到新公司后，发现大家都没有使用，几个实验室连保护柱都没找到一个，也就是说大家从来都没有用过。后来问一个老员工，说是有可能影响药品分析。
我就想问：安装保护柱后会影响样品分析吗？我们做的大多是头孢类的抗生素。
如果用一个质量好的又和分析柱匹配保护柱，应该不会影响分析。匹配指的选用柱芯填料和分析柱填料在粒径和固定相类型上一致，质量好，首先要求柱芯装填质量一定要好，不能因为是柱芯，就随便把填料用干法往里面一放就完事了；另外柱芯卡套接入系统的产生的死体积要小。
一个质量好的保护柱，有时还能增加分离柱效。
这个问题我考虑过！但有个担心的问题，就是由于我们的大多检测标准时欧盟或美国药典标准，因此填料、柱长、直径都固定了，如果选择保护柱的话，还需要考虑那么多吗？
原文由 xue2009(xue2009) 发表:原文由 xingwangyang(xingwangyang) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教，
请问：我在做多肽药物时遇到下列问题
1. 基线不稳定波动大 流动相 A ：1％TFA水溶液 B:1％TFA乙腈溶液 检测波长210nm 流速：1.0ml/ml 什么原因？怎么解决？TFA有什么作用？
流动相中不加TFA见不到主峰，基线良好。
2. 做完肽类样品时 怎么冲洗C18比较好？
3. 药典上介绍测定分子量大于2000的样品，选择柱子填料的孔径为30nm，30nm与10nm对结果有什么区别
TFA在这里起对离子的作用
原文由 xingwangyang(xingwangyang) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教，
请问：我在做多肽药物时遇到下列问题
1. 基线不稳定波动大 流动相 A ：1％TFA水溶液 B:1％TFA乙腈溶液 检测波长210nm 流速：1.0ml/ml 什么原因？怎么解决？TFA有什么作用？
流动相中不加TFA见不到主峰，基线良好。
2. 做完肽类样品时 怎么冲洗C18比较好？
3. 药典上介绍测定分子量大于2000的样品，选择柱子填料的孔径为30nm，30nm与10nm对结果有什么区别
原文由 majinfei8(majinfei8) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教，
请问：waters Atlantis C18柱可以用较高比例的流动相，那麽用完后应该怎麽清洗？在什麽体系中保存比教合适？谢谢。
流动相中不含缓冲盐 | 分析完成后，用甲醇（或乙腈）：水＝90：10反向冲洗色谱柱45min |
流动相中含有缓冲盐 | 分析完成后，先用甲醇（或乙腈）：水＝10：90反向冲洗45min，然后再用甲醇（或乙腈）：水＝90：10反向冲洗色谱柱45min；（注意：甲醇（或乙腈）：水＝10：90容易长菌，使用时间不可超过3天）； |
原文由 plexu(plexu) 发表:原文由 小卢(luxw) 发表:
这个问题我考虑过！但有个担心的问题，就是由于我们的大多检测标准时欧盟或美国药典标准，因此填料、柱长、直径都固定了，如果选择保护柱的话，还需要考虑那么多吗？
美国药典欧洲药典对填料和柱长并没有规定很死，是允许在一定范围内调整的，加保护柱肯定不违反药典的规定。
| Method Parameter | Acceptable Modification | Monograph 0703 Atenolol | Kinetex 2.6 µm Fast Method | Modification |
| Mobile phase pH | ±0.2 units | 3 | No change | -- |
| Concentration of salts in buffer | ±10% | As specified | No change | -- |
| Ratio of components in mobile phase | ±30% of the minor component(s), or 2% absolute of that component, whichever is greater, but a change in any component can not exceed ±10% absolute | As specified | No change | -- |
| Wavelength of UV detector | no deviations permitted | 226 nm | No change | -- |
| Injection volume | Increased to as much as twice the volume specified, provided no adverse effects—must be within stated linearity range of the method | 10 µL | No change | -- |
| Column temperature | ±10° | Ambient | No change | -- |
| Column length | ±70% | 125 mm | 100 mm | -20% |
| Column inner diameter | ±25% | 4.0 mm | 4.6 mm | +15% |
| Particle size | -50% | 5 µm | 2.6 µm | -48% |
| Flow rate | ±50% | 0.6 mL/min | 0.9 mL/min | +50% |
Table 1: Acceptable modifications for meeting system suitability (Source: European Pharmacopoeia guidelines) | ||||
| Fully porous 5 µm | Kinetex 2.6 µm C18 0.9 mL/min | Kinetex 2.6 µm C18 1.3 mL/min | ||
| Column dimensions | 125 × 4.0 mm | 100 × 4.6 mm | 100 × 4.6 mm | |
| Particle size | 5 µm fully porous | 2.6 µm core shell | 2.6 µm core shell | |
| Flow rate | 0.6 mL/min | 0.9 mL/min | 1.3 mL/min | |
| Backpressure | 168 bar | 270 bar | 380 bar | |
| Resolution of impurities J & I | 1.95 | 3.72 | 3.65 | |
| S/N ratio for Impurity J | 40 | 78.1 | 78.7 | |
| S/N ratio for Impurity I | 12.3 | 30.2 | 28.7 | |
| S/N ratio for Impurity G | 3.31 | 9.38 | 9.33 | |
| N of Impurity J | 8,206 | 21,118 | 19,473 | |
| Elution time of last peak | 33.3 min | 11.9 min | 8.0 min | |
Table 2: Improvements to EP Monograph 0703 for Atenolol and related substances using core-shell particle technology results in a three- to four-fold reduction in analysis time and organic solvent usage. (Source: Phenomenex) | ||||
原文由 xue2009(xue2009) 发表:原文由 xieqinqin(xieqinqin) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教，
请问：用的是四元梯度泵 A50%甲醇 B50% 水 经常出现停 或进气泡 这是什么原因？
这个比例下因为使得流动相黏度最大，所以最容易产生气泡了，一般我们设计洗脱程序都避开这个比例。
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