2 结 果
2.1 样品提取剂 磺胺类药物为白色或微黄色结晶性粉末,难溶于水,较易溶于稀释、稀碱和有机溶剂。因此选用乙酸乙酯作为样品的提取剂;乙酸乙酯难溶于水,提取时较难渗入样品内部,故加入无水硫酸钠,使样品成疏松状,可更好地进行回收。
2.2 LH20凝胶柱洗脱净化效果 取空白鸭肉样品的乙酸乙酯提取物作为基质组分,试验了9种磺胺药物及基质组分在LH-20葡聚糖凝胶柱上的流出时间。结果显示,基质组分洗脱液流出时间为10~17 min,9种磺胺类药物洗脱液流出时间为20~40 min,9种磺胺药物均与基质组分得到很好分离,达到净化效果。因此,在GPC净化时选择收集20~40 min的流出液,弃去其余部分。
2.3 乙腈-0.1%三氟乙酸梯度洗脱效果(图1) 经过对梯度洗脱程序进行优化,选定合适的梯度洗脱时间程序。图1可见,在选定的HPLC色谱条件下,9种磺胺在药物峰形及分离良好。
注:1:磺胺嘧啶;2:磺胺吡啶;3:磺胺噻唑;4:磺胺甲嘧啶;5:磺胺二甲嘧啶;6:磺胺甲噻唑;7:磺胺氯哒嗪;8:磺胺甲恶唑;9:磺胺异恶唑。
图1 9种磺胺类药物混合标准溶液(0.5mg/L)色谱图
2.4 鸭肉加标样品HPLC分析(图2) 图2可见,经GPC净化的加标样品,可以得到9种磺胺类药物分离较为清晰的色谱图。
注:1:磺胺嘧啶;2:磺胺吡啶;3:磺胺噻唑;4:磺胺甲嘧啶;5:磺胺二甲嘧啶;6:磺胺甲噻唑;7:磺胺氯哒嗪;8:磺胺甲恶唑;9:磺胺异恶唑。
图2 加标鸭肉样品(加标浓度:0.25mg/kg)经GPC净化
后的HPLC色谱图
2.5 线性关系和检测限 取9种磺胺混合标准溶液,按配置的标准系列,以选定的色谱条件进行测定,以峰面积Y对浓度X(mg/L)进行线性回归。9种磺胺药物均具有良好的线性关系,相关系数(r)均在0.999 8~0.999 9;检测限为4.6~8.0 μg/kg,定量限为15~27 μg/kg。
2.6 精密度和回收率(表1) 表1可见,9种磺胺类药物回收率为70.3%~84.7%,相对标准偏差为1.6%~5.8%。回收率较高,相对标准偏差低,方法的重现性较好。表1 鸭肉中磺胺类药物不同加标水平回收率和精密度实验结果
3 小 结
GPC净化技术主要是基于分子大小的原理进行分离的,它具有重现性好,回收率高,适用于多残留分析等特点。本实验结果表明,GPC-HPLC法测定动物源食品中9种磺胺类药物残留,由于前处理使用GPC,可以除去大部分干扰物的影响,与其他方法相比,本方法具有快速、灵敏、准确的特点