主题：【资料】传递窗验证方案

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发表于：2010/09/16 10:34:56 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

Validation protocol of the delivery windows

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目录
Contents

1 简介 4
2 实施计划 4
3 验证小组成员 4
4 仪器及用具 4
5 菌株和培养基 5
6 安装确认 5
7 运行确认 5
8 性能确认 6
9 再验证 8
10 修改事项 8
11 相关SOP 8
12 附件 8
1 简介
传递窗是一种洁净室的辅助设备，主要用于洁净区与洁净区之间，洁净区与非洁净区之间小件物品的传递，以减少洁净室的开门次数，使洁净室的污染降低到最低程度。传递窗内安装有紫外灯，物品经紫外线照射消毒后进入洁净区。紫外线是一种电磁辐射，波长190～350nm，其中以253.7nm的杀菌力最强，可使DNA链上相邻嘧啶碱基之间形成二聚体，抑制DNA的复制，导致突变或死亡。紫外线的杀菌力与紫外线强度、照射时间、温度和湿度等因素有关。
本方案包括该设备的安装确认、运行确认和性能确认等内容。在确认过程中出现任何偏差，必须及时解决偏差之后再进行下一步的确认。
实施内容时间安排
安装确认
运行确认
性能确认
2 实施计划
3 验证小组成员
部门姓名职责
QA 负责验证方案、验证报告的批准
负责验证方案、验证报告的审核
QC 负责验证方案、验证报告的审核，指导和监督方案的实施
负责验证方案、验证报告的起草，参加方案的实施
负责验证方案、验证报告的审核，协助方案的实施
4 仪器及用具
名称型号或规格校验单位校验编号有效期
细菌培养箱 GNP-9270型广州市计量所
霉菌培养箱 SHP-150型广州市计量所
数显式温湿度计 DWS508D 广州市计量所
紫外线强度测定仪 TN-2254 广州市计量所
净化工作台 HS-1300-V型 —— —— ——
电动混匀器 G560E —— —— ——
移液器 0.5～10ul
移液器 100～1000ul
5 菌株和培养基
名称批号生产厂家
营养琼脂培养基
改良马丁琼脂培养基
营养肉汤培养基
改良马丁培养基
金黄色葡萄球
[CMCC（B）26003]
枯草芽孢杆菌
[CMCC（B）63501]
大肠杆菌
[CMCC（B）44102]
白色念珠菌
[CMCC（F）98001]
6 安装确认
由供应商技术人员作为主要安装人员，工程部人员协助安装。安装过程中对装置及其工作状态进行检查。若确认过程中发现因为紫外灯管不符合要求而造成偏差，工程部人员负责紫外灯管的申购与更换。将安装确认结果记录于附件1和附件2。
确认项目描叙
工作环境确认传递窗应安装在非洁净区（培养室）与洁净区（洁净走廊）之间。
非洁净区温度应为18℃～27℃；相对湿度应为40%～80%。
电源确认设备的电源应正确连接，工作电源：AC （220±22）V。
装置确认确认紫外灯管功率。
紫外灯管应正常，无损坏，匹配，紧密连接。
传递窗侧门垫圈应配套、密合、完好。
传递窗内部与紫外灯管表面应清洁，表面无尘土。
传递窗内表面材质应为不锈钢，平整光洁耐磨。
备件确认是否有相同型号规格的紫外灯管备用。
7 运行确认
运行确认在安装确认之后进行，若安装确认出现偏差，须在解决偏差之后进行。通过对传递窗进行试运行，以证明设备各项技术参数和功能能达到本公司设定要求。将运行确认结果记录于附件3和附件4。
7.1 SOP确认：确认是否有传递窗使用的SOP，作为传递窗使用操作的技术支持与指导。验证全过程必须严格按照此SOP对传递窗进行操作。
7.2 设备操作功能确认：逐项确认各项操作功能，结果均应符合要求。
7.3 互锁确认: 两侧门设有互锁装置，确保两侧门不能同时处于开启状态。
7.4 辐照强度测定：开启紫外灯5min后，用中心波长为253.7nm的紫外线强度测定仪
在灯管下方垂直中心操作面处测量其辐照度值（uW/cm2）。普通型或低臭氧型直管紫外灯，新灯管的辐照度值应为：功率10W，≥65 uW/cm2 ；功率15W，≥145 uW/cm2 。使用中的灯管其辐照度值：功率10W，≥45 uW/cm2 ；功率15W，≥100 uW/cm2 ，低于此值者应予以更换。
7.5 紫外强度分布：开启紫外灯5min后，在传递窗底部测量中央及四角5个位置的紫
外线强度（uW/cm2），确定紫外线强度最弱位置。以紫外线强度最弱位置达到所需照射剂量的时间作为消毒合格时间。
洁净区

非洁净区
8 性能确认
确认紫外灯对细菌及其芽孢和真菌的杀灭效果。性能确认在运行确认之后进行，若运行确认出现偏差，须在偏差解决之后进行。
8.1 培养基的制备
8.1.1 营养琼脂培养基
配方：营养琼脂培养基粉 31.0g
纯化水 1000ml
配制：称取营养琼脂培养基粉置适宜容器中，按配方比例加入纯化水，水浴加热使溶解，调pH至7.1±0.2，分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌121℃×15分钟。
8.1.2 改良马丁琼脂培养基
配方：改良马丁琼脂培养基粉 42.0g
纯化水 1000ml
配制：称取改良马丁琼脂培养基粉，按配方比例加入纯化水，水浴加热使溶解，调pH至6.4±0.2，分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌115℃×20分钟。
8.1.3 营养肉汤培养基
配方：营养肉汤培养基 20g
纯化水 1000ml
配制：称取营养肉汤培养基20克，加1000ml纯化水，加热溶解，加热至沸，冷却至常温，分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌121℃×15分钟。
8.1.4 改良马丁培养基
配方：改良马丁培养基粉 28.0g
纯化水 1000ml
配制：称取改良马丁培养基粉，按配方比例加入纯化水，水浴加热使溶解，调pH至6.4±0.2，分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌115℃×20分钟。
8.2 菌悬液的制备
8.2.1 接种金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中,30～35℃培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中,23～28℃培
养18～24小时。
8.1.1 细菌芽孢悬液的制备：
8.1.1.1 取枯草芽孢杆菌增菌液适量至营养琼脂培养基斜面，使菌液布满营养琼脂培养基
斜面，30～35℃培养5～7天。用接种环取菌样少许涂于玻片上，固定后以改良芽孢染色法染色，并在显微镜（油镜）下进行镜检。当芽孢形成率达95％以上时，即可进行以下处理。否则，应在室温下放置一定时间，直至达到上述芽孢形成率后再进行以下处理。
8.1.1.2 取适量无菌水于营养琼脂培养基斜面，以L棒轻轻推刮下菌苔。吸出第一批洗下
的菌悬液，再取适量无菌水于营养琼脂培养基斜面，重复洗菌一遍。将第一和第二批洗下的菌悬液集中于一含玻璃珠的无菌三角烧瓶内，振摇5min，打碎菌块，使成均匀的芽孢悬液。
8.1.1.3 将芽孢液放于80℃水浴中10min（或60℃，30min），以杀灭残余的细菌繁殖体。
待冷至室温后，保存于4℃冰箱中备用。有效使用期为半年。
8.2 稀释液
1％蛋白胨—PBS溶液：取磷酸二氢钾1.36g、磷酸氢二钠2.83g、蛋白胨10.0g，加水1000ml，微温溶解，分装，置高压灭菌器121℃×30分钟灭菌。
8.3 菌片的制备
8.3.1 试验中使用的菌片是以菌液滴加于载体上制成（1.0cm×1.0cm的不锈钢片）。所
用载体染菌前应进行脱脂处理。脱脂方法如下：①将载体放在含肥皂的水中煮沸30min；②纯化水洗净；③纯化水煮沸10min；④用纯化水漂洗至pH呈中性；⑤晾干备用。
8.3.2 载体经灭菌后使用滴染法染菌。将灭菌载体平放于灭菌平皿内，每个载体滴注
10ul菌悬液，用10ul移液器接灭菌塑料吸头，滴染菌液，并用接种环涂匀整个载体表面。滴染菌液后，染菌载体可置超净台上晾干后使用。
8.3.3 每个菌片的染菌量即回收菌量应为1×105～5×106 cfu/片。
8.4 载体定量消毒试验
8.4.1 取4种菌染菌载片各4个。开启紫外灯5min后，将16个染菌载片平放于无菌平
皿内，水平放于紫外线强度最弱的位置处照射，于4个不同间隔时间（15min、30 min、45 min、60min）各取出1个染菌玻片，分别投入4个盛有10ml稀释液的试管中，用电动混匀器震荡20s或振打80次，洗脱载片上的菌体。
8.4.2 取洗脱液或其稀释液1ml，作平板倾注。细菌放30～35℃培养48小时做活菌计
数，真菌放23～28℃培养72小时做活菌计数。
8.4.3 阳性对照，除不做照射处理外，操作同上。
8.4.4 杀灭对数值计算
杀灭对数值（KL）＝对照组活菌浓度对数值-试验组活菌浓度对数值
8.4.5 消毒合格时间
在照射强度最弱处，对细菌及其芽孢和真菌的杀灭对数值≥3所需的时间即为消毒合格时间。其它传递窗，确定最弱照射强度后，根据所需照射剂量确定消毒合格时间。
照射剂量（uW•s/cm2 ）＝紫外线照射强度（uW/cm2）×时间（s）
将性能确认结果记录于附件5。
9 再验证
9.1 传递窗构造或紫外灯管安装位置发生改变时，需进行再验证。
9.2 若无任何改变或偏差时，每6个月对该系统进行紫外灯强度确认。
10 修改事项
在实施过程中，如果方案需要修改，必须提交书面报告，阐述修改的原因、修
改的内容，并经过相关部门及QA的认可。修改后的方案同先前执行的方案一起归档。
11 相关SOP
编号文件名称
微生物实验室管理
物品进出微生物检验室
微生物检验区的清洁消毒
培养基的配制
细菌的接种、传代和保存
高压灭菌
微生物数量的测定
12 附件
编号附件名称
附件1 安装确认记录1（微生物室）
附件2 安装确认记录2（无菌室）
附件3 运行确认记录1（微生物室）
附件4 运行确认记录2（无菌室）
附件5 性能确认记录