主题：【第三届原创参赛】C18与丙基酰胺硅胶柱对肌肽分离能力比较

维权声明：本文为huomeng520原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

本实验建立了一种以牛肉中肌肽为代表，反相分离测定亲水性物质的方法。该方法选用丙基酰胺键合硅胶亲水作用色谱柱，反相分析测定牛肉中亲水性成分—肌肽的含量。该方法操作简单，样品无需衍生处理。通过该法结合 H P L C—M S联用技术确定了保留时间为10.276～10.609min的色谱峰就是肌肽峰。将该色谱柱与常规C18色谱柱进行对比后发现，该色谱柱对L-肌肽的保留能力和分离能力均优于C18柱。此法精密度实验显示其相对标准偏差（RSD%）为1.06%，最低检测限为4.59×10^-2mg/L。最后实验结果表明:亲水性色谱柱反相使用时，完全适用强极性物质含量的测定，通过实际样品分析检测，每克牛肉的肌肽含量为0.011克。

引言
L-肌肽（L-carnosine）是一种水溶性二肽，在1900年由Gulewitsch和Amiradzhibi[1]在牛肉提取物中发现。L-肌肽天然存在于多种脊椎动物的骨骼肌以及新陈代谢旺盛的脑中。它具有广泛的生物活性，如抗氧化、保护膜的完整性、抗糖基化、质子缓冲、调节巨噬细胞活性等[2]，是维持机体正常状态的一种含量很低的物质[3]。
L-肌肽的结构为β-丙氨酰—L-组氨酸。L-肌肽的结构如图1所示。从化学结构上看，肌肽由于含有较多的极性基团（-OH、-NH2、-COOH），水溶性特别强。肌肽的正辛醇—水分散系数为-2[4]，远远小于0，理论上说明了L-肌肽的强极性，不溶于任何有机溶剂，属于亲水性成分。
近年来，L-肌肽的研究一直受到人们关注。其含量测定方法一直在探索中。目前已报道的L-肌肽的分析方法主要以高效液相色谱法为主[5]，且多采用柱前衍生化法，这种方法试剂成本高，样品预处理繁琐，且分析时间长，不利于对样品的快速检测。也曾有报道将离子色谱[6]和毛细管电泳色谱[7]应用于L-肌肽的测定，但两种方法较为复杂，且仪器操作较为繁琐。将氨基柱应用于反相高效液相色谱，能实现对样品中L-肌肽快速、准确地检测[8]，但氨基柱不耐水解，长时间在反相条件下使用，会缩短氨基柱的使用寿命。所以应选择一款既耐水解，柱效又高的色谱柱对牛肉中L-肌肽进行分析。
色谱柱填料通常是以硅胶为载体，在硅胶表面进行修饰。C18色谱填料是在硅胶表面键合非极性的十八烷基碳，属于非极性色谱填料。根据“相似相亲原则”，应选用极性较强的色谱柱分析极性物质，普通的C18反相色谱柱属于非极性色谱柱，对亲水性成分没有保留能力[9]，因此不能满足对此类物质的分析要求。实验中选用丙基酰胺键合硅胶柱，该色谱柱填料以硅胶为载体，表面键合丙基酰胺基团，极性强，耐水解，适用于对极性物质的分离。马婧玮采用此柱，实现了对亲水性井冈霉素A快速准确的定量分析[10]。本次实验从L-肌肽的性质出发，结合色谱柱的性质，将丙烯酰胺键合硅胶色谱柱与常规C18柱进行对比，并借鉴田颖刚等人[8]已发表的L-肌肽质谱分析条件，选择分离效果最好的色谱柱与电喷雾质谱串联使用，对牛肉中肌肽进行了分析鉴定。