液相色谱-质谱/质谱法(
LC-MS/MS
试样用三氯乙酸溶液提取,经阳离子交换固相萃取柱净化后,用
液相色谱-质谱/质谱法测定和确证,外标法定量。在添加浓度0.01mg/kg~0.5mg/kg浓度范围内,回收率在80%~110%之间,相对标准偏差小于10%。称取1g(精确至0.01g)试样于50mL具塞塑料离心管中,加入8mL 1%三氯乙酸溶液和2mL乙腈,超声提取10min,再振荡提取10min后,以不低于4000r/min离心10min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后,做待净化液。若样品中脂肪含量较高,可以用三氯乙酸溶液饱和的正己烷液-液分配除脂后再用SPE柱净化。将上述待净化液转移至固相萃取柱中。依次用3mL水和3mL甲醇洗涤,抽至近干后,用6mL氨化甲醇溶液洗脱。整个固相萃取过程流速不超过1mL/min。洗脱液于50℃下用氮气吹干,残留物(相当于1g试样)用1mL流动相定容,涡旋混合1min,过微孔滤膜后,供
LC-MS/MS测定。
试剂盒检测法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay ELISA)
试剂盒检测法即为酶联免疫吸附剂测定,是利用萃取液通过均质及震荡的方式提取样品中的三聚氰胺进行免疫测定的一种方法。
将三聚氰胺HRP酶标记物、标样及样品提取液加入包被三聚氰胺抗体的试验孔中孵育在30min的孵育过程中,样品中的三聚氰胺与HRP酶标记物竞争结合三聚氰胺抗体。孵育完后,倾去孔内液体洗涤除去未结合的三聚氰胺和HRP酶标记物。每孔加入清澈的底物溶液,结合的酶标记物将无色的底物转化为蓝色的物质。孵育30min后终止反应,用酶标仪读取450nm下各孔的OD值。比较未知样品的OD值与标样的OD值,就可计算出样品中的三聚氰胺浓度,最低可检测到10ppb以下的三聚氰胺残留,检测过程约需65min