主题：【求助】连续3针进样，保留时间依次延长，峰面积依次增大，RSD远远超过2%？

请教一下各位，我连续3针进样，主峰保留时间依次延长，峰面积依次增大，RSD远远超过2%~~~
之前没出过这样的问题，方法用了一年半多了，比较可靠
流动相是0.1%三氟乙酸水，0.1%三氟乙酸乙腈，流动相中的三氟乙酸、水、乙腈都经过严格处理的
柱温25度，样品室液5度，样品平衡时间1个小时，然后进了3针空白~~~~
洗脱梯度
时间（min）      流速（ml/min）            A(%)              B(%)
                                1                                    90                  10
          2                    1                                    90                  10
          20                  1                                    80                  20
          35                  1                                    25                  75
          36                  1                                    90                  10
          45                  1                                    90                  10

机器是Waters 2695,先后换用过3台仪器，柱子是Symmetry sheild RP18，先后换用过3根，情况还是这样
奇怪的是把进样体积由10微升改为5微升后，情况能好很多
之前做了那么长时间没问题，忽然间出现这个情况，怎么做都是这样，请各位帮我出出主意，谢谢了