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主题：【求助】营养琼脂培养基灭菌有部分后长菌？

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lushaomei1234

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发表于：2011/06/12 23:01:49 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

上周五灭菌的营养琼脂培养基一周天后一瓶长菌了？咋回事？请教高手帮忙。
我按照厂家说明书上要求配置和灭菌，115℃灭菌30分钟，灭菌完后等待冷凝了，放在4℃的冰箱中，每次微波炉加热熔化后使用都废弃，这几次实验时，偶尔出现异常现象，查找污染原因，稀释剂没问题，最后拿剩下的两瓶未使用的培养基直接培养，其中一瓶长菌了，我真不晓得咋回事？
配制培养基那一周做过菌液配制，但是所有的玻璃容器都灭菌的，除了装营养琼脂培养基的瓶子，觉得只是倒培养基，应该不会被菌种污染，所以没有灭菌。一直配营养琼脂培养基的锥形瓶都是这几个瓶子。
一直以来我们都是我按照厂家说明书上要求配置和灭菌，115℃灭菌30分钟，灭菌完后等待冷凝了，放在4℃的冰箱中，都没有发生过培养基长菌。

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2011/6/12 23:14:54 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

除了装营养琼脂培养基的瓶子，觉得只是倒培养基，应该不会被菌种污染，所以没有灭菌。一直配营养琼脂培养基的锥形瓶都是这几个瓶子。

那问题应该是在这吧，如果参照以前既往的惯例，应该是混进细菌了所以才会长，微生物因为眼睛无法辨别，所以不能凭感觉，只能严格按操作规程处理。

以前在药厂，培养基都是用120度30分钟灭菌的。

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【四季风】

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2011/6/13 10:17:00 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我认为灭菌完后，培养基应放置恒温培养18至24小时后，如果没有细菌生长再放入4℃冰箱中保存备用，如果有菌生长（视菌落多少）则需重新灭菌或重新配制。

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2011/6/13 10:26:23 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

由于灭菌时，放置营养琼脂培养基瓶子的位置不同，培养基瓶子中心位置所受的压力和温度有所不同，所以极少数的培养基瓶子灭菌不一定很彻底（有的芽胞还没有死亡），因此才长菌。

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lushaomei1234

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2011/6/13 10:37:31 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

厂家说明书上时115℃灭菌30分钟。我也觉得假如配制过程中被污染，那么115℃灭菌30分钟决定是杀死不了芽胞的，芽胞是在121℃，30分钟才能杀死。
配置到放入灭菌锅过程是花费的时间是半个小时左右，应该不会长菌那么快吧？
密封的锥形瓶里的培养基只是表面长菌，是需氧菌吧？是不是说明锥形瓶没有密封好呢？

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