快速导航采购仪器提醒

食品毒素/微生物检测

版主:

入住本版

专家:

仪器信息网

居民列表

仪器社区 > 食品检测 > 食品毒素/微生物检测帖子详情

快速回复发表新帖最新帖

主题：【分享】免疫细胞的分离和保存技术

浏览0 回复13 电梯直达

可能感兴趣

去年冬天

禁止发帖修改昵称

ID：7336167

行业：其他

积分：0升级还需100积分

声望：0升级还需100声望

注册时间：0000-00-00

最后登录时间：0000-00-00

进入iLog 私信关注

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2011/6/18 11:32:03 11楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

如果在测定活性之前所贮的样品酶活性有了降低，无论所用的仪器如何先进，也不能获得准确的结果。在适当的条件下酶会失活，因而必须强调在收集样品之后应尽可能快速测试酶活性，最好当天进行测定。关于酶样品的贮存与处理应注意以下几点：

1．酶活力测定最常用的样品是血清或血浆。制备血浆所用的抗凝剂可抑制某些酶的活性，如EDTA 能抑制ALP ，草酸盐抑制LDH ，肝素对CK 及某些其他酶有轻微的抑制作用，故一般样品以血清为佳。

2．多数血清酶以较高浓度存在于红细胞、白细胞或血小板中。因此分离血清时应注意避免溶血。

3．光照对CK 活性有抑制作用，因此，主张CK 测定的血清应贮存于4 ℃ 的暗处，测定时应该注意避光。

4．由于血清白蛋白对酶蛋白有稳定作用，在它的存在下，某些酶（如转氨酶）在室温下可保存1～2 天而无明显失活。

5．有些酶由于自身的特性，在贮存时需特别加以注意。例如LDH 同工酶（LDH 3、LDH 4、LDH 5）在冰箱保存不稳定，在室温反而稳定时间较长，所以测定LDH 活力的血清样品，应置于室温下，2～3天内可保持稳定，不能存放冰箱过夜。

6．由于酶很容易发生表面变性，因此在操作时应避免形成泡沫。

7．巯基（－SH ）对于大多数酶来说是十分重要的，可能起如下几方面的作用：① 参与催化；② 和底物结合；③ 组成变构部位；④维持酶的三级或四级结构。因此，使巯基保持天然状态是使许多酶稳定化的最重要的条件之一，基于这个理由，在酶的活性测定、抽提、制备以及保存过程中，常可添加－SH 保护剂，如半胱氨酸、谷胱甘肽、2－巯基乙醇、二硫苏糖醇、二硫赤藓糖醇等。

赞贴

拍砖

去年冬天

禁止发帖修改昵称

ID：7336167

行业：其他

积分：0升级还需100积分

声望：0升级还需100声望

注册时间：0000-00-00

最后登录时间：0000-00-00

进入iLog 私信关注

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2011/6/18 11:46:29 12楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

免疫组织化学技术（immunohistochemistry）又称免疫细胞化学技术（immunocytochemistry）是利用已知的抗体与细胞抗原特异性相结合的特性，通过化学反应使标记在抗体上的显示剂显示一定的颜色，并借助显微镜、荧光显微镜或电镜进行观察，以达到对组织、细胞结构中化学成分进行定量、定位分析的目的。

免疫细胞化学染色是将血液、骨髓液、浆膜腔积液等等各种体液组织制成的涂片和骨髓等组织的切片经各种单克隆抗体的标定和常用的过氧化物酶或碱性磷酸酶显色后对白血病细胞直接镜检，以确定细胞类型。

免疫组织化学染色方法繁多，可根据标记物的不同分为：免疫酶细胞化学染色、免疫荧光细胞化学染色、免疫金银染色技术以及亲合免疫组织化学染色技术等。目前血液系统疾病检查常用免疫细胞化学染色方法有三种：过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法、碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶（APAAP）法和亲和素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC-AP）法。PAP法抗原、抗体反应及酶标原理与APAAP法完全相同，都属于免疫组织化学反应，只是所标记的酶不同。PAP法酶化学反应原理与ABC-AP法完全相同，但ABC-AP法为亲合免疫组织化学反应。在染色步骤及方法上PAP法和ABC-AP法完全相同。

免疫细胞化学能够识别抗原蛋白质一级结构中氨基酸的差别，从而对细胞结构、功能及细胞代谢等进行综合分析，确定细胞的类型、来源及细胞的分化阶段。应用骨髓切片免疫组织化学技术可以对骨髓细胞进行原位观察，通过对细胞特异性抗原的定性、定位和定量分析，了解骨髓组织和细胞的结构和变化，这对血液系统疾病尤其是血液系统肿瘤的诊断、鉴别诊断，以及血液肿瘤的分类、分型和预后的判断提供了有利的研究手段。

赞贴

拍砖

去年冬天

禁止发帖修改昵称

ID：7336167

行业：其他

积分：0升级还需100积分

声望：0升级还需100声望

注册时间：0000-00-00

最后登录时间：0000-00-00

进入iLog 私信关注

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2011/6/18 11:47:10 13楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

一、碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶染色

碱性磷酸酶抗碱性磷酸染色（alkaline phosphatese antialkalinephosphatesw；APAAP）：先用鼠单克隆抗体（McAb）制备碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶单克隆抗体(APAAP)复合物,然后按照细胞抗原成分与第一抗体(鼠抗人单抗)、第二抗体(兔抗鼠抗体)、APAAP复合物依次结合后，经碱性磷酸酶底物显色，阳性反应产物呈紫红色沉淀于与McAb对应的抗原部位。APAAP染色可应用于白血病免疫分型和免疫细胞亚群的检测等。

二、过氧化物酶抗过氧化物酶染色

过氧化物酶抗过氧化物酶（Peroxidaseantiperoxidase;PAP）染色：用单克隆抗体（McAb）与细胞反应后分别加入第二抗体和PAP复合物与其作用，经过过氧化物酶底物显色，阳性反应产物呈棕黄色沉淀于McAb对应的抗原部位。PAP染色可应用于白血病免疫分型和免疫细胞亚群检测等。

赞贴

拍砖