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主题：【已应助】内标法测量前，先混合后过滤，还是先过滤后混合？

浏览0 回复9 电梯直达
jianfkunzhong
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发表于：2011/07/07 14:33:03 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
液相内标法测量前，先混合后过滤，还是先过滤后混合？
大家好。

采用内标法测量物质A，内标物为B。

已单独配置好500 ug/mL的A和B，想稀释成10  ug/mL 的A和B，然后混合，用HPLC测出峰面积后，根据进样质量和峰面积的关系求出F. A和B的溶解性均大于500 ug/mL。

请问 哪种测试方法正确
1)将500 ug/mL 的A和B 分别稀释成10  ug/mL,  再各取A和B 1mL混合，过滤，进行测试（这时A和B的进样质量比为1：1）
2)将500 ug/mL 的A和B 分别稀释成10  ug/mL，过滤，再各取A和B的滤液 1mL混合，进行测试 （这时A和B的进样质量比为1：1）
3) 将500 ug/mL 的A和B 分别过滤，各取1mL混合，将滤液再稀释到10  ug/mL，进行测试（这时A和B的进样质量比为1：1）

在测量未知样品时，假设未知样为含有A的水溶液，再采取以上一种方法进行求解F的测试后，内标物应该怎样加到待测样品中呢？是取相同体积的未知样和内标物 (10  ug/mL) 混合后进行过滤，还是先将未知样过滤后，再混合同体积的内标物(10  ug/mL)和样品进行测试呢？

多谢了~~
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capinter
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2011/7/7 15:11:27 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
应该要在过滤前定容一定体积加入内标物吧。
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andyerlee
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2011/7/7 15:44:43 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
之前我用过的是先混合后过滤，先过滤后混合没有试过，试试就知道了
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inno12580
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2011/8/15 13:04:42 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一起加入，过滤
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pazuzu
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2011/8/15 14:35:07 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不必加相同体积的，内标定量加入即可，我们一般加样品1/10体积的，混合后，按样品处理方法进行处理。10ug的话进质谱浓度大了
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peterhello
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2011/8/15 14:43:14 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一般配置一个浓度较高的内标溶液，只加入一个相对于样品溶液很小的体积。比如950ul sample + 50ul IS。
至于在哪一步加入内标，却决于你想用内标解决测试中的什么问题。是校正前处理的损失，还是响应的误差等。
内标法不一定就比外标准确，不要为了做内标而做内标。

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peterhello
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2011/8/15 14:43:46 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
为什么用内标
考虑到例如液质的离子化效率，基质效应，或者气质衍生化，复杂的萃取过滤前处理等一些比较难控制的影响因素，内标法的准确度可能更高一些，而且也取决于内标选择的好与不好。
如果样品基质比较简单，没有复杂的前处理，只是溶解稀释然后进样的话，完全可以用外标法。如果基质比较复杂可以用空白基质配置外标曲线。如果空白基质不易获得可以用标准加入法配置外标曲线。这些情况下使用内标法不一定更准确。

用什么样的内标
内标选择的原则就是尽量和待测物的物理化学性质一致，最好的内标是同位素内标，但是不易获得，一般都选用结构类似物，具有相似的物化性质，色谱行为和质谱响应。所以内标的选择是要考察的，内标选的不合适只会事倍功半

内标什么时候加入
取决于加入内标的目的，前处理回收率不稳定，那么就应该在前处理之前就加入内标。只是校正检测器响应，那么可以在进样前加入内标。内标加入的浓度最好和待测物浓度相当。内标标准曲线法中内标浓度选择曲线中间附近浓度。加入体积尽量小，对样品基质不构成显著影响。
该帖子作者被版主 nankingee加 2积分， 2经验，加分理由：感谢分享
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2011/8/15 14:58:06 Last edit by peterhello
mbd0377
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2011/9/22 21:02:14 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
路过学习，谢谢分享
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Longer
ptwx
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2011/9/25 21:48:12 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一般是先加入内标再过滤。
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小猪飞飞
zpf20031212
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2011/10/9 23:42:32 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
除了摸索方法、考察仪器响应，一般还是先加内标，再进行一系列的前处理。如上面版友所述，不能盲目于内标，内标只是能在一定程度上校正误差，但也不能保证绝对的准确，也要通过数据进行验证。
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