1.2 实验步骤
1.2.1 前增菌
无菌操作将样品(编号:3)(以下简称:样品)移取1mL接种到225mLBPW 的锥形瓶中,摇匀,于36 ℃±1 ℃培养8 h~18h。剩余的样品放入4℃冰箱中以备必要时复查。
1.2.2 增菌
轻轻摇动培养过的样品混合物,移取1mL,转种于10mL TTB 内,于42 ℃±1 ℃培养18 h~24h;同时,另移取1 mL,转种于10 mL SC 内,于36 ℃±1 ℃培养18 h~24 h。
1.2.3 分离
分别用接种环取增菌液1 环,划线接种于BS 琼脂平板和科玛嘉显色培养基平板,BS 琼脂平板于36℃±1℃培养40 h~48 h;科玛嘉显色培养基平板于36℃±1℃培养18 h~24 h。
平板上的菌落特征:在BS 琼脂平板上菌落呈黑色有金属光泽,菌落周围呈棕黑色。在科玛嘉显色培养基平板上菌落呈紫红色、蓝色。
从菌落特征上可初步判断,样品含有沙门氏菌属可疑菌落。
1.2.4 生化试验
分别从SC、TTB增菌液挑取进行划线分离的科玛嘉显色培养基上各挑取3个典型的较大的紫红色菌落接种TSI琼脂,接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂(NA)平板。同时接种蛋白胨水 (靛基质试验)、尿素琼脂 (pH7.2)、氰化钾 (KCN) 、甘露醇、山梨醇、ONPG,接种完毕,于36 ℃±1 ℃培养18 h~24 h。已挑取菌落的平板及纯化的NA平板储存于4℃冰箱中,以备必要时复查。
生化反应结果: 三糖铁琼脂底层产酸、斜面产碱、产气、产H2S;赖氨酸脱羧酶(+)、靛基质(-)、pH7.2尿素(-)、 KCN(-) 、甘露醇(+)、山梨醇(+)、ONPG(-)。注:(+)表阳性,(-)表阴性。
1.2.5 革兰氏染色实验
挑取显色平板上的菌落进行革兰氏染色,为革兰氏阴性短杆菌。
1.2.6 血清学鉴定
1.2.6.1 多价菌体抗原(O)鉴定
在玻片上划出2个约1cm×2cm 的区域,从TSI斜面上挑取1 环待测菌,各放1/2 环于玻片上的每一区域上部,一个区域下部加1 滴多价菌体(O)抗血清,另一区域下部加1 滴生理盐水,作为对照。用无菌的接种环分别将两个区域内的菌落研成乳状液。将玻片倾斜摇动混合1 min,并对着黑暗背景进行观察,任何程度的凝集现象皆为阳性反应。
结果:样品与 A-F群O多价血清混合物试验凝集,而在盐水对照中不凝集。呈阳性反应。
1.2.6.2 多价鞭毛抗原(H)鉴定
操作同1.2.6.1。
结果:样品与H因子血清i混合物试验凝集,而在盐水对照中不凝集。呈阳性反应。