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紫外可见分光光度计（UV）
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主题：【求助】用紫外可见分光光度计测浓溶液线性透过率时的问题

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tjuwlh
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发表于：2011/11/09 14:07:03 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用紫外可见分光光度计测一个浓溶液的线性透过率，浓度大概在0.75 mol L-1。这个样品的吸收谱范围在400-700，在1064nm肯定没有吸收。但是测试出现下面的问题：
1、用1cm池子测得时候，在1064nm波长的线性透过率只有45%，但是相同的溶液换到1mm的池子在1064nm的透过率就有95%了。
2、把这个溶液稀释一倍再用1cm池子测，透过率又到了90%以上。
疑问：
1、溶液在1064nm无吸收，1cm池子中线性透过率的损失应该不是线性吸收造成的，那么应该是什么原因？散射？
2、如果是散射，那么为什么相同的溶液在1mm池子中损失这么少？溶液对光的散射跟厚度有什么样的关系？


这是我把透过率转换成Abs的图，浓度很大了，0.75M，应该不是太准确，但是意思一样。图中两条线是同一个溶液在1cm和1mm池子里的吸收，1mm池子里在1064nm处明显几乎没有吸收了，而1cm池子里在1064nm处则有很大的吸光度值。这个样品在这个波长下应该没有吸收，所以这里测出来的吸收值是不是应该归因于散射造成的？那么为什么1mm池子里的散射却不明显？
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ldgfive
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2011/11/9 14:31:43 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
透过率看不太懂，最好转换为Abs再分析，结果更明了
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tjuwlh
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2011/11/9 15:01:15 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ldgfive(ldgfive) 发表:
透过率看不太懂，最好转换为Abs再分析，结果更明了

已经转换并作说明  见主帖  谢谢解答
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wahaha1210
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2011/11/10 10:50:35 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
朗伯比尔定律：A=kbc,A:吸光度，b：比色皿光程长，C：浓度
吸光度和光程长成正比，用长光程的比色皿测量吸光度自然大些
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wahaha1210
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2011/11/10 10:52:47 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 wahaha1210(wahaha1210) 发表:
朗伯比尔定律：A=kbc,A:吸光度，b：比色皿光程长，C：浓度
吸光度和光程长成正比，用长光程的比色皿测量吸光度自然大些

用光程长的比色皿，光的散射损失自然大些，这种情况下，可能用积分球做散射损失没这么大
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tjuwlh
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2011/11/10 11:15:55 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 wahaha1210(wahaha1210) 发表:
原文由 wahaha1210(wahaha1210) 发表:
朗伯比尔定律：A=kbc,A:吸光度，b：比色皿光程长，C：浓度
吸光度和光程长成正比，用长光程的比色皿测量吸光度自然大些

用光程长的比色皿，光的散射损失自然大些，这种情况下，可能用积分球做散射损失没这么大

谢谢你的回答。
朗伯比尔定律我知道，吸光度与光程有关这个是很自然的。
但是我的样品稀溶液（10-5 M）测试吸收谱时，吸收谱范围在400-700nm，700之后没有吸收。现在我测透过率时用的是0.75 M的溶液，其浓度应该远超过朗伯比尔定律的适用范围，而且根据我之前做过的其他样品的经验，在1064nm这些样品应该是没有吸收的，透过率应该都接近100%。所以我在想这个样品浓溶液在1064nm线性透过率的损失是不是应该归因于散射造成的损失。
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tutm
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2011/11/10 18:48:35 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
从两种光程的比色皿测试结果看，没什么问题呀。800nm处，1cm的吸光度4不到些，1mm的大约也是0.4不到些.

一般吸光度与溶液浓度成正比，你的样品稀溶液（10-5 M）测试吸收谱时，各个波长下的吸光度差不多只有现在浓溶液吸光度的1-7万分之一。就按你上图的1064nm，吸光度约0.7来算，稀溶液在这个波长下的吸光度只有0.00001-0.00007，透光率在99.984-99.998%。一般分光光度计只有3位有效数字，也许就当100%了。
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2011/11/10 22:32:21 Last edit by tutm
zwyu
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2011/11/10 22:02:29 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用积分球测一下漫透射，结论可能大不相同。
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tjuwlh
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2011/11/11 8:15:04 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 tutm(tutm) 发表:
从两种光程的比色皿测试结果看，没什么问题呀。800nm处，1cm的吸光度4不到些，1mm的大约也是0.4不到些.

一般吸光度与溶液浓度成正比，你的样品稀溶液（10-5 M）测试吸收谱时，各个波长下的吸光度差不多只有现在浓溶液吸光度的1-7万分之一。就按你上图的1064nm，吸光度约0.7来算，稀溶液在这个波长下的吸光度只有0.00001-0.00007，透光率在99.984-99.998%。一般分光光度计只有3位有效数字，也许就当100%了。
但我把这个浓溶液稀释一倍之后，也就是浓度变成一半后，在1064nm的透过率却一下子上升到90.3%，换算成吸光度也就有0.04左右，稀释之前吸光度在0.7左右，这也不太符合浓度的关系吧？所以我觉得还不是吸收的问题？
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tutm
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2011/11/11 12:42:30 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
要证实是不是光散射引起的，如果有条件可以用荧光光度计测一下看看，将激发波长和发射波长设置成一样波长，看看不同浓度溶液的入射光垂直方向的散射光强度有没有变化，但是可能最高只能测到900nm
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