主题：【分享】[基本原理] 超声破碎的原理

浏览0 回复1 电梯直达

省部重点实验室

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

发表于：2012/02/24 21:15:12 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

超声破碎的原理：
超声波是物质介质中的一种弹性机械波，它既是一种波动形式,又是一种能量形式。超声对细胞的作用主要有热效应，空化效应和机械效应。热效应是当超声在介质中传播时，摩擦力阻碍了由超声引起的分子震动，使部分能量转化为局部高热（42－43℃）。空化效应是在超声照射下，生物体内形成空泡，随着空泡震动和其猛烈的聚爆而产生出机械剪切压力和动荡。另外，空化泡破裂时产生瞬时高温（约5000℃）、高压（可达500×104Pa），可使水蒸气热解离产生.OH自由基和.H原子，由.OH自由基和.H原子引起的氧化还原反应可导致多聚物降解、酶失活、脂质过氧化和细胞杀伤。机械效应是超声的原发效应，超声波在传播过程中介质质点交替地压缩与伸张构成了压力变化，引起细胞结构损伤。损伤作用的强弱与超声的频率和强度密切相关。所以如果使用玻璃管，可能会碎裂，而通常使用的是塑料试管。

1、大肠杆菌表达外源蛋白，在超声破碎的时候，用含有1%triton-X-100的PBS悬浮，然后超声的效果较好，1%triton-X-100的作用还是很明显的，对其他的一些细菌同样起作用，比如链霉菌。
2、3、酵母破碎的问题/
a、一般的PROTOCOL都是用glass beads，破碎酵母细胞sigma G-8772 酵母破碎效果好的我所做过的方法中还是玻璃珠，效率很高，而且对目的蛋白活性不会有什么影响。一般应该用这个方法。
b、化学裂解的方法，10g酵母加1ml的乙酸乙酯，充分搅拌至液体状。此法的裂解效果不错的。加尿素裂解液（尿素8mol/L, NaCl 0.5mol/L,Tris 20mmol/L, EDTA 20mmol/L, 2%SDS, PH值8.0），据说效果可以
c、毕氏酵母细胞破碎法
文献上的方法： The pelleted cells were resuspended in 200 ll 1±8 M NaOH, 1±2 M b-mercaptoethanol, and incubated for 5 min on ice. After addition of 200 ll 10%TCA, the mixture was incubated for 5 min, centrifuged, and the pellet was resuspended in 50 ll 2?SDS-PAGE loading buffer and neutralized at pH 7±0 by adding 5±10 ll 1 M Tris base. The samples were heated to 95 °C for 3 min before loading onto SDS-PAGE gels (12% acrylamide). 若是想得到胞内蛋白可以用蜗牛酶处理，效果比较好！