炔诺酮中炔雌醇的测定

1 绪论

采用各种已报道的方法测定避孕药片中乙炔雌二醇(EO)。这些方法包括分光光度法，高压液相色谱，薄层色谱和比色法。Corti等人用二阶导紫外分光测定二元混合物的雌激素和孕激素，相对标准偏差 5%以内。Ebeletal等人报告说,有几个方法确定EO的口服避孕药片,包括利用直接,差分 derivative紫外分光法和直角多项式法。作者报告说,后者的方法得到了最可靠的结果。

最近, 事实已经证明,应用分光光度法的衍生技术是非常有益的，在解决光谱重叠, 消除来自其他样品不相干吸收。不过，在某些情况下，衍生的技术无法应付的干扰，尤其是当不相干的吸收是线性依赖于谱中的纯化合物，在这种情况下，微分分光光度法是有用的。

改变pH值比其他任何变化的化学条件用的都多，尤其对化合物呈现红移或蓝移。如果这种化学位移发生，在场的pH值不灵敏不相干吸收(z)可能被消除由于从''a''到''b''改变了溶剂。因此,aa=(aa+z)-(ab+z). 但是,在某些情况下,不相干的吸收也可能会这么大的贡献,这只是部分消除，即aa=(Aa-Ab)+z'，z'=za-zb而且小于z,和zb。在这种情况下,应用衍生技术可弥补z'. 这将是主要竞争优势的应用衍生差法的运用各方面的技术. 尽管在这方面的优势相对较少应用衍生差法已经发表。

本文报告了简单, 快速而准确的方法直接测定1：20的乙炔雌二醇和炔诺酮中的乙炔雌二醇含量，本文采用一种新的方法,也是基于使用差分分光光度法。

2 方法

2.1 器械：

使用55os紫外可见分光光度计有固定狭缝宽度(2nm) A Perkin-Elmer (0berlingen, FRG)；日立56i记录器(东京日本)。光谱测试及参考溶液置于1cm石英池内，量程340至220nm.。适当的设定:扫描速度晶体120nm/min; 图表速度为60毫米/分钟; 衍生模式D1(一导)和D2 (二导); 最大最小量程大约D1为0.2；D2为0.01; 响应时间10s. 对于差动测量，零点设定方法为，把一个池充满甲醇放在参照格，其他池充满甲醇氢氧化钠溶液在样品格。调整后，测量激素溶液在两种溶剂中所测得的数据是一致的。激素的甲醇溶液是放置在参照格而激素的甲醇氢氧化钠被放置在样品格。

2.2 试剂和材料：

样品EO及NE由CID Company, Giza, Egypt承蒙提供。甲醇氢氧化钠溶液混合制备。1毫升1 N的氢氧化钠溶液与9毫升甲醇混合。anovlar避孕片器(CID公司)分别标明含有EO 0.05毫克和NE1.0omg每片。所有试剂和化学品使用的为分析纯试剂系。 EO溶液制备为溶解40mgEO在5~8ml甲醇，再取10ml 这种溶液用甲醇进一步稀释至50ml毫升。

2.3 测定炔雌醇：

两个5毫升部分激素溶液转入两个单独10m容量瓶中(A和B)。在B中加入1ml氢氧化钠溶液，再将两个瓶子A和B分别完以甲醇定容。B的一导D1和二导D2的零级谱已经记录对应甲醇氢氧化钠溶液为空白。绝对振幅(峰到零线)D1和D2分别测300和304nm。对于微分测量法，溶液A置于参考格，溶液B置于样品格，Δ吸光率（ΔA = Ab – Aa），对于ΔD1（==dΔA/dλ）和ΔD2（==d2ΔA/dλ2）的绝对值分别在295、 301和304nm测量 (图一C). 药物浓度计算得到相应的参照EO校准图。

2.4避孕片溶液制作程序：

100片药片去膜洗涤后在烘箱中烘干，秤量然后磨成粉末状。含量相当于4mg的EO粉末取出置于烧杯中，加入5ml蒸馏水。烧杯中水浴加热约5min.。加入30ml甲醇搅拌5min。将冷却的溶液移至用50ml的容量瓶中，用甲醇定容。

3 结果与讨论.

图一(a,b和c)表明零阶光谱67.5 μmol /L EO和1.34mol/ L NE(比率1:20,模拟片)及导数模式(D1和D2),以及微分光谱(ΔA)及其导数方式(ΔD1和ΔD2)在甲醇和甲醇氢氧化钠溶液。

被酚化的EO拥有红移与增色效应在甲醇溶液是碱性(图1, A和B), NE发现重大贡献度在双方的零阶光谱。在另一方面NE作出了积极贡献在EO甲醇、甲醇氢氧化钠溶液在284和300nm的D1信号。一个负的贡献在EO甲醇及甲醇氢氧化钠溶液在287和304nm的D2信号。这意味着应用Amax的一导或者二导模式的方法是容易发生错误的结果。此外,NE的ΔA曲线 (图ic),具有积极贡献对EO的ΔA曲线。不过, NE在301和304nm有无贡献的ΔD1和ΔD2信号。这使我们不得不用ΔD1和ΔD2的值确定EO的量.。根据描述的实验条件, 线性获得ΔD1和ΔD2与浓度EO的量程60-400μmol /L. 两个回归方程foundto是:

ADt = -0.0034 + 6.809*10 -4 C (r = 0.9998 )

AD2 = -0.0002 + 0.472*10 -4 C (r = 0.9998)

测定EO含量使用ΔD1和ΔD2的方法作了相对标准偏差2.06和1.45%。

评估测定NE中的EO的可行性，合成一系列混合物，他们的比率和分析测量结果列于表一，从这些结果可以发现以下结论：

-较高的结果用ΔD1和ΔD2方法是由于NE对EO所做的积极贡献, 在附近280-320nm光谱中可知。低的结果用ΔD1和ΔD2方法是由于NE的负贡献的,信号的范围为280-310nm。

-该法运用ΔD1和ΔD2得到了较为精确和准确的结果。

实验发现采用所提出的方法在1：40(EO: NE)中也可以准确测定。

运用ΔD1和ΔD2方法测定环氧乙烷避孕片平均百分率发现100.2+1.73和99.0+0.89。

在药片中的可能干扰成分是不容忽视的。因此, 标准添加原则是用来评估方法及程序的正确性等样品和测试来自药片成分干扰。用ΔD1和ΔD2方法测量，被添加的EO的回收率99.4%至100.0%和9.86%到100.9%。一导和二导模式的吸收曲线表明这方法能在改进解析重叠峰和干扰光谱背景方面有良好的表现。

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