主题:【第六届原创】注射用帕米膦酸二钠含量测定方法研究

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tangtang
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支持分坛团队和化学药分析版。

我公司产品注射用帕米膦酸二钠执行标准为《中国药典》2010年版二部。含量测定项下的内容为:

“【含量测定】照离子色谱法(附录 V J)测定

色谱条件与系统适用性试验用阴离子交换色谱柱;以3mmol/L草酸溶液为流动相,流速为每分钟1.2ml;检测器为电导检测器。理论板数按帕米瞵酸二钠峰计算不低于2000。”

我们在检测中发现,含量测定色谱柱的理论塔板数下降较快。经研究,将流动相由“3mmol/L草酸溶液改变为“**溶液,可使柱效明显稳定。方法学验证结果显示,变更后的方法准确、可靠。可用于我公司产品注射用帕米膦酸二钠含量测定。

1仪器与试药

1.1仪器

岛津LC-20A高效液相色谱仪,配CDD-10A VP电导检测器。所用仪器和量具均经校准或检定。

1.2试药

对照品帕米膦酸二钠(经160干燥至恒重,按干燥品计含量100.2%,按100%计。)。辅料、水为超纯水。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱Dionex  IonPac AS22阴离子交换色谱柱(4 mm ×250 mm),配保护柱(4 mm ×50 mm);流动相**溶液;检测器为电导检测器;柱温35;流速1.2ml/min。进样量为20μl。理论塔板数按帕米膦酸二钠峰计算应不低于2000

2.2溶液的制备

2.2.1空白辅料储备液:取辅料适量,按处方配成溶液备用。

2.2.2空白辅料溶液:取空白辅料储备液5ml置于50ml容量瓶中,加水定容至刻度。

2.2.3对照品溶液:精密称取帕米膦酸二钠对照品约30mg,置于50ml容量瓶中,用水溶解并定容。

2.2.4供试品溶液:精密称取帕米膦酸二钠对照品适量(根据不同验证项目,称取不同量),置于50ml容量瓶中,加水溶解后,加入5ml空白辅料储备液并用水定容。



2.3专属性试验

空白溶剂:水。

取空白溶剂、空白辅料溶液、对照品溶液、供试品溶液,照2.1色谱条件,依法测定,记录色谱图。(附图略)

结果显示,对照品溶液和供试品溶液的色谱图中帕米膦酸二钠峰与其他峰之间分离度良好,分离度大于1.5;空白溶剂及空白辅料溶液色谱图中在帕米膦酸二钠峰处无干扰峰。本方法有良好的专属性。

2.4 线性关系及范围

精密称取帕米膦酸二钠对照品14.5824.2830.5836.1345.80 mg,分别置50ml量瓶中,用水适量溶解后,加入5ml空白辅料储备液并用水定容,摇匀,制成每1ml中含帕米膦酸二钠0.29160.48560.61160.72260.9160mg的系列溶液。照2.1色谱条件,各精密量取上述系列溶液20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。以帕米膦酸二钠峰面积为纵坐标,帕米膦酸二钠浓度(mg/ml)为横坐标,作图,进行线性回归。

测定结果如下(附图略):

注射用帕米膦酸二钠含量测定方法验证:线性关系试验结果



序号


1


2


3


4


5


浓度(mg/ml


0.2916


0.4856


0.6116


0.7226


0.9160


峰面积


706336


1167035


1475202


1755366


2237689


校正因子


2.06417E-05


2.08049E-05


2.07294E-05


2.05826E-05


2.04675E-05


线性关系回归方程为:Y=2455988X-18726


相关系数r=0.9999n=5


截距<100%浓度响应值的2%


校正因子RSD=0.6%



曲线图:



0.29160.9160mg/ml的浓度范围内(相当于注射用帕米膦酸二钠标示量的50%~150%),帕米膦酸二钠峰面积与浓度(mg/ml)之间呈良好的线性关系。

2.5进样精密度试验

取对照品溶液,连续测定6次,计算6次峰面积的RSD



测定次数


1


2


3


4


5


6


峰面积A


1528751


1515391


1515906


1496740


1505302


1509383




平均峰面积A=1511912    RSD=0.72%



结果显示进样精密度良好。

2.6回收率试验

精密称取帕米膦酸二钠对照品约243036mg3份(详细称样量见下表),分别置50ml量瓶中,用水适量溶解后,加入5ml空白辅料储备液并用水定容,摇匀,制成每1ml中含帕米膦酸二钠0.480.600.72mg的系列溶液(即相当于标示量80%100%120%3个浓度的溶液),每份溶液测定2次。计算每份样品溶液的回收率、各浓度回收平均值及总回收率均值,公式如下:

回收率=实测量÷加入量×100%

测定结果如下(附图略):

注射用帕米膦酸二钠含量测定方法验证:回收率试验结果-1



加入量

mg


实测量

mg


回收率


平均值


RSD


总平均值


RSD


24.28


24.10


99.24%


99.07%


0.18%


99.77%


0.81%


24.10


99.27%


24.37


24.13


99.00%


24.16


99.12%


24.12


23.83


98.80%


23.87


98.98%


30.58


30.75


100.56%


100.06%


0.82%


31.04


101.52%


30.21


30.01


99.35%


30.12


99.69%


30.20


30.07


99.57%


30.11


99.69%


36.13


36.32


100.52%


100.16%


0.79%


36.56


101.18%


36.05


36.15


100.27%


36.25


100.54%


35.10


34.91


99.45%


34.76


99.02%


结果显示准确度良好。

2.7重复性试验

2.6的回收率试验可以看出,本法重复性良好。

2.8中间精密度

由另一检验员,在另一天重新进行回收率试验,同时也是重复性试验,结果如下:

注射用帕米膦酸二钠含量测定方法验证:回收率试验结果-2



加入量

mg


实测量

mg


回收率


平均值


RSD


总平均值


RSD


24.31


24.18


99.46%


99.30%


0.41%


99.80%


0.51%


24.18


99.23%


24.01


23.67


98.58%


23.81


99.18%


24.16


24.08


99.67%


24.08


99.67%


30.52


30.61


100.30%


100.03%


0.44%


30.69


100.57%


30.15


30.14


99.96%


30.05


99.66%


30.25


30.34


100.31%


30.07


99.41%


36.22


36.34


100.32%


100.07%


0.25%


36.28


100.16%


36.15


36.17


100.06%


36.23


100.23%


36.53


36.55


100.05%


36.39


99.61%


结果显示中间精密度良好。

2.9溶液稳定性

取对照品溶液及供试品溶液,分别在室温放置约0246810小时,依法测定。

测定结果如下(附图):

注射用帕米膦酸二钠含量测定方法验证:对照品溶液稳定性考察结果



测定时间


0h


2h


4h


6h


8h


10h


峰面积A


1515486


1506762


1498116


1496981


1497095


1499961


0小时偏差


/


0.58%


1.15%


1.22%


1.21%


1.02%




平均峰面积A=1502400    RSD=0.49%,偏差均小于2.0%



注射用帕米膦酸二钠含量测定方法验证:供试品溶液稳定性考察结果



测定时间


0h


2h


4h


6h


8h


10h


峰面积A


1585143


1583315


1584608


1597966


1597860


1601466


0小时偏差


/


0.12%


0.03%


0.81%


0.80%


1.03%




平均峰面积A=1591726    RSD=0.52%,偏差均小于2.0%



上述结果显示,本方法对照品溶液及供试品溶液在配制完成后室温放置10小时内稳定。

3结论

我公司注射用帕米膦酸二钠含量测定流动相变更的分析方法进行了研究。结果表明变更后的方法专属性、线性关系及范围、准确度、精密度和溶液稳定性均良好,符合规定;变更后的分析方法适用于我公司产品注射用帕米膦酸二钠的含量测定,检验数据准确可靠。
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2012/12/31 23:38:09 Last edit by tangtang 举报
tangtang
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表格贴过来格式有点怪,编辑也改不了。
titi
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嗯!表格不能直接拷贝,边框的线条过不来,截图形式比较好!
影子
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这个产品没有上中国药典?变更之后要备案吧?
影子
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溶液稳定性不需要对照溶液与样品溶液都做吧?
影子
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糖糖这个验证全部做完要多长时间?溶液稳定性一共才做到10个小时,需要做到多长时间糖糖是怎么选择的?
tangtang
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原文由 影子(hyheying) 发表:
这个产品没有上中国药典?变更之后要备案吧?


是药典品种,变更后只作为内控标准,如果是药检所抽检还是按药典。
tangtang
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溶液稳定性不需要对照溶液与样品溶液都做吧?


对照品溶液中没有辅料,可能有区别的。
tangtang
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糖糖这个验证全部做完要多长时间?溶液稳定性一共才做到10个小时,需要做到多长时间糖糖是怎么选择的?


两三天吧,耐用性没有做,稳定性时间考虑一个工作日,对照品溶液还要做储存稳定性的。
影子
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这个产品没有上中国药典?变更之后要备案吧?


是药典品种,变更后只作为内控标准,如果是药检所抽检还是按药典。

日常检测是不是两种方法都要做?
影子
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溶液稳定性不需要对照溶液与样品溶液都做吧?


对照品溶液中没有辅料,可能有区别的。

哦,如果没有辅料都是原料药是不是只做一种就行了呢?