主题:【第六届原创】高效液相色谱法检测灭蝇胺(有补充,快来看)

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houjjun
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高效液相色谱法检测灭蝇胺

概要

鸡舍附近的苍蝇都死了,主因是现代化养鸡场自身及周边环境的洁净度都很高,不可能有污水横流蚊蝇遍地等情景。而饲料中添加灭蝇胺则是世界通行的方法。在饲料中按规定使用方法添加制成预混剂的5ppm的灭蝇胺,即环丙氨嗪,并遵守三天休药期的规定,鸡肉中环丙氨嗪最高残留限量将低于0.05 mg/kg的限值,至于还能进入人体的,更是微乎其微了。另外,环丙氨嗪脱烷基代谢作用后生成的三聚氰胺残留也是极其微量且毒性小的,目前欧盟及国际食品农药残留法典委员会均未制订此项标准,我国风险评估显示灭蝇胺代谢产生的极低三聚氰胺残留是没有安全风险的。但对于养鸡场而言,通过全方位提高环境卫生质量来消除蚊蝇滋生,才能取胜于长远之道。

物化性质:

化学名称:环丙氨嗪;赛诺吗嗪;2-环丙胺基-4,6-二氨基-1,3,5-三嗪

英文名:Cyromazine, 2-Cyclopropylamino-4,6-diamino-s-triazine

分子式:C6H10N6

分子量:166.18

熔点:≥219.0°C

干燥失重:≤1.0%

外观和性状:白色结晶性粉末,蒸气压≥0.13mpa(20°C),密度1.35g/cm3(20°C)。溶解性(20°C)水中1100mg/1(PH7.5)稍溶于甲醇、不燃烧、不爆炸、一般贮藏稳定(310°C以下)。

灭蝇胺结构式:


实验部分

1、仪器
高效液相色谱仪(紫外检测器)

2、试剂
强碱性阴离子交换树脂:柱色谱用强碱性阴离子交换树脂用5倍体积的1mol/L盐酸洗涤2次,再用水洗至中性后,接着用5倍体积的1mol/L氢氧化钠溶液洗涤2次,再用水洗至中性后,悬浮在水中,保存在阴暗处。
强酸性阳离子交换树脂:柱色谱用强酸性阳离子交换树脂用5倍体积的1mol/L氢氧化钠溶液洗涤2次,再用水洗至中性后,接着用5倍体积的1 mol/L盐酸洗涤2次,再用水洗至中性后,悬浮在水中,阴暗处保存。
标准品:灭蝇胺含量大于99%

3.溶液的制备
A 提取方法

豆类:将样品粉碎通过420μm的标准网筛后,称取其10.0g,加入20mL水,放置2小时。
水果和蔬菜:准确称取约1kg样品,必要时定量加入适量水,搅碎混合均匀后,称取相当于20.0g样品的量。
加入100mL水:甲醇(1:9)混合溶液,搅拌3分钟后,用涂布1cm厚硅藻土的滤纸抽滤于300mL三角瓶中。取出滤纸上的残留物,加入50mL水:甲醇(1:9)混合溶液,搅拌3分钟后,按上述同样操作,合并滤液于三角瓶中,加入水:甲醇(1:9)混合溶液,准确至200mL。
B 净化方法
①强酸性阳离子交换树脂柱色谱法在内径10mm、长300mm色谱管中注入3mL悬浮在水中的强酸性阳离子交换树脂(粒径50-150μm),放出水至柱上端留有少量水。注入20mL水,弃去流出液。柱中注入50mL a 提取方法所得的溶液后,以每分钟5mL流速流出,弃去流出液。再注入50mL水:甲醇(1:9)混合溶液后,以每分钟5mL流速流出,弃去流出液。再注入10mL甲醇,按上述同样操作,弃去流出液。移去柱的抽滤装置后,注入35mL氨水:甲醇(1:3)混合溶液,收集流出液于磨口减压浓缩器中,45℃以下除去氨水和甲醇。残留物中加入5mL水溶解。
②强碱性阴离子交换树脂柱色谱法
在内径10mm、长300mm色谱管中注入2mL悬浮在水中的强碱性阴离子交换树脂(粒径100~500μm),放出水至柱上端留有少量水。注入10mL水,弃去流出液。柱中注入①强酸性阳离子交换树脂柱色谱法所得的溶液后,以每分钟2 mL流速流出,流出液移入磨口减压浓缩器中。再注入10mL水,合并流出液于磨口减压浓缩器中,45℃以下除去水。残留物中加入3mL水溶解。
③十八烷基甲硅烷基化硅胶色谱法
在十八烷基甲硅烷基硅胶小柱上(500mg)中注入10mL甲醇后,注入10mL水,弃去流出液。柱中注入②所得的溶液后,弃去流出液。再注入3mL甲醇:水(1:19)混合溶液,弃去流出液。再加入10mL甲醇:水(7:3)混合溶液。收集流出液于磨口减压浓缩器中,在45℃以下除去甲醇和水。残留物中加入乙腈:水(98:2)混合溶液溶解,准确至2mL。此为试验溶液。

4、色谱条件
柱填充剂:酰胺丙基甲硅烷基化硅胶
色谱柱:长250mm,内径4.6mm,粒径5μm
检测波长:215nm
流动相:乙腈:水(98:2)混合溶液。
流速:1ml/min
温度:室温



根据出峰时间定性,峰面积定量,外标法计算,结果准确可靠。
5.标准品检出限:
0.01mg/kg

注意:本文有几个要点需要注意。

1.    灭蝇胺在210nm-254nm有比较好的紫外吸光值,流动相一般选择甲醇-水、乙腈-水或是甲醇-缓冲盐和乙腈缓冲盐(乙酸铵溶液或是磷酸盐溶液)。
2.      选乙腈-水及乙腈-缓冲盐做流动相时,检测波长一般选择210nm-220nm;选甲醇-水及甲醇-缓冲盐做流动相时,检测波长一般选230-250nm
3.      选乙腈-水作为流动相,乙腈含量一般选95%-98%;选甲醇-水作为流动相,甲醇含量一般为40%-50%
4.      前处理比较繁琐,前处理时时间尽量长一点,温度尽量低一些,混合、提取、搅拌、净化等操作一定要充分、到位。

本文流动相选择乙腈-=98% : 2%,检测波长选择215nm,检测结果准确、可靠,灵敏度高(检出限低),重现性好,回收率高,线性范围宽且线性好,分析时间短,峰形好,对色谱柱要求低,常规C18高效液相色谱柱都可以。

结论:此方法方便、可靠,可检测多种物质(如水果、蔬菜,豆制品,水,,饲料,肉制品等等)中的灭蝇胺,但前处理方法每种物质都不尽相同,前处理方法仅供参考,其它物质参考其它前处理方法。

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2013/1/5 21:02:04 Last edit by houjjun 举报
titi
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亲,欢迎参赛,这是您开发的方法吗?结果如何啊?
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原文由 titi(carollee) 发表:
亲,欢迎参赛,这是您开发的方法吗?结果如何啊?
这是我们实验室参考其它方法做了点改动做的
yuduoling
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原文由 yuduoling(yuduoling) 发表:
方法不错,新方法需要验证一下不?
在做的时候,对条件进行的优化,验证过,没问题的
tangtang
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酰胺丙基甲硅烷基化硅胶这个类型的色谱柱比较少见啊,特点是什么?
houjjun
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原文由 tangtang(tangtang) 发表:
酰胺丙基甲硅烷基化硅胶这个类型的色谱柱比较少见啊,特点是什么?
具体我也说不上,我们实验室有个化学分析的高手,色谱柱一般由他来选
tangtang
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酰胺丙基甲硅烷基化硅胶这个类型的色谱柱比较少见啊,特点是什么?
具体我也说不上,我们实验室有个化学分析的高手,色谱柱一般由他来选


我们如果要测什么新品种,就先网络搜索一下有没有相关文献作参考。
houjjun
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酰胺丙基甲硅烷基化硅胶这个类型的色谱柱比较少见啊,特点是什么?
具体我也说不上,我们实验室有个化学分析的高手,色谱柱一般由他来选


我们如果要测什么新品种,就先网络搜索一下有没有相关文献作参考。
这也是必须的,但这个工作主要由他来做的。我们有分工的,哈哈。
小不董
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houjjun
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原文由 小不董(doxw0323) 发表:
前处理很重要,也很繁琐。
色谱做样难点一是色谱条件,一是前处理,相比前处理工作量和繁琐程度是很大的