主题:【第六届原创】02年的国标现在落后了

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houjjun
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02年的国标现在落后了



    现在经济高速发展,各方面的需求也是飞速的。对于我们实验室的工作人员也是如此,既要提高自身的职业素质,也要完善实验室的设备、技术、规范等。当然检测项目也在增加,需要的检测方法也越来越多。

    现在我们进行检测时大多都是要有依据的,一般都是依据国标、地标和像药典之类的行标等的。然而需求在快速的增加,有些标准的改进和完善的速度略显慢了些。

    最近我做实验时就遇到了一个问题(相信好多实验室工作人员都遇到过)。我们检测的是饲料中的维生素B1、B2、B6,依据的是国标GB/T14700—2002、GB/T14701—2002、GB/T14702—2002中的高效液相色谱法。明白的人一看就知道这几份国标是2002年起草的,一直延续到现在还在使用(实际饲料检测甚至还有2000年,九几年起草的国标)。这些国标已十多年没变了,十年中国却发生了翻天覆地的变化。这个标准还算简单,参考这个标准做这几种维生素却让我吃尽了苦头。下面就具体说一下,先说下维生素B1的测定的国标GB/T14700—2002(其它两种维生素的国标的情况和这种非常类似)。

    首先说一下色谱条件。

    先看下国标是怎么说的吧。

    维生素B1、B2、B6检测时流动相一样。

    国标方法中的色谱柱是waters 公司的Nova-pak C18,4um,3.9 X 150mm色谱柱。这款色谱柱市面上并不多,进口的可能也比较贵吧。流速是0.8ml/min,这个流速我觉得是和色谱柱的内径是有关的,3.9um内径的色谱柱0.8ml/min的流速是最佳流速。现在我们碰到的分析型色谱柱内径大多都是4.6um的,这个内径的最佳流速是1.0ml/min。温度25℃--28℃,这个温度我不知道是色谱柱温度,还是检测池温度,是环境温度还是系统温度,这个有些难理解,幸好这个温度和室温差不多,还好控制(现在的技术控制温度是绝对没问题的,不管是控制哪里,关键是得知道要控制哪里)。保留时间7min—8min,我做的却相差甚远。下面就具体介绍下。

色谱条件:

检测器:紫外(UV)检测器

色谱柱:Pgrandsil STC C18 250*4.6mm,5um

流动相:与该国标中所说的相同

流速:1.0ml/min

柱温:27℃

进样量:10ul

波长:246nm

    我的色谱条件与国标的有一些差别,国标的保留时间7min—8min,我的保留时间可能会晚一些,我估计可能在10min—15min吧,所以我把采样时间设成20min。结果连续进了很多样,在这个时间段内就是不出峰,郁闷。后来我想是不是时间短了些,还没到出峰时间采样就已结束了,但这个已经比国标的时间长了很多了呀。抱着怀疑的态度,我把采样时间从20min改为了30min。结果还是不出峰。

    这就奇怪了,这套设备刚做完其它的样品,是正常的呀,现在难道坏了。设备各方面运行的都挺正常,我觉得应该是没问题的。接下来我又把流动相中的甲醇含量从14%调到20%,结果在20min内仍没出峰。调到25%仍没出峰,再大没敢调了,因为一是这个条件已经比国标提供的高了很多了,出峰时间应该缩短很多才是;二是怕流动相中甲醇含量太高有盐结晶析出,损坏色谱系统。

    这就头疼了,怎么会出现这种情况,怎么就不出峰呢。我是不想弄了,于是我请我的一位同事帮我重新做一遍看看,看看是不是我哪一步操作错了。他做结果还是没出峰。这个结果我们都很意外,我们觉得可能还是仪器的问题。于是我们又全面的检查了仪器,发现一切正常,并没问题。

    这太奇怪了,我没办法了。索性就随便进一针,出就出,不出就先冲冲仪器吧,采样时间我也设成了300min。

    说也奇怪,意外出现了。维生素B1这次竟然出峰了,出峰时间是我之前想也没想到的31.3min。我怕这次出峰是次意外,于是又连续进了三针,结果都出峰了,出峰时间大约都是31.3min。哦,原来这样,在这个色谱条件下出峰这么晚呀,和国标上差了这么多。

    维生素B1对照品色谱图:

维生素B2和维生素B6检测的色谱条件与维生素B1的完全一样,维生素B2对照品色谱图:

    这个出峰时间也比国标中的10min晚的多,是39.6min。

    维生素B6对照品色谱图:

    这个出峰时间同样比国标中的4min—5min晚,是22.4min。

    下面一个问题,那就是样品前处理。

    国标上样品前处理是这样说的。



    国标提取样品中的维生素主要是靠超声20min提取。现在饲料样品各种各样,有的样品超声20分钟样品中的维生素根本不能完全提取,这个我们也见识过了。结果是同一样品每处理一次,结果都不一样,有时差的还挺多。我们现在采用的方法是先超声10min,再静止2小时,最后再超声10min。这样同一样品多次处理结果基本一样,效果很好。

    后来我咨询了相关专家,他们给我的建议是:

    1. 样品要粉碎;
    2. 溶解、提取时间适当长一些;
        3.  超声时温度尽量高一些,最好能到80℃左右;
        4.  超声提取后最好能离心处理。

    最后还有一个问题,那就是如果样品中有在所测维生素出峰时间附近有干扰杂质时,要适当调整流动相中的甲醇含量,尽量使所测维生素色谱峰与干扰杂质色谱峰完全分离,必要时采用梯度洗脱。下面这个就是我们测得一个维生素B1的色谱图:

    像这个色谱图,维生素B1出峰都三十多分钟了,峰附近还有干扰物,而且挨的很近,那出峰时间要是在7min—8min,那这两个峰不就粘成一个峰了。所以这个方法的出峰时间是长了些,但对某些样品的分析还是有利的,还是很好的。

    02年的国标现在是不是落后了,很多地方是不是都该有变化了。我觉得国标过一段时间就得修改下了,否则可能就会落后了。

    在做实验时国标只作参考,具体问题要具体分析,要有相应的应对方法。有些国标已显落后,希望相关部门能及时完善、补充。

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2013/10/23 21:24:25 Last edit by houjjun 举报
三人行
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houjjun
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原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:
国标要完善不是很容易的事。
这倒是,需要时间,过程也很麻烦
shjnzh7908
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国标是固定的,人是变化的,真的需要我们具体问题具体分析。
wulin321
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很多九几的标准都在用呢,标准没有想象的那么‘完美’
houjjun
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原文由 shjnzh7908(shjnzh7908) 发表:
国标是固定的,人是变化的,真的需要我们具体问题具体分析。
要两方面都好就好了。一是国标更科学、完善些,而是我们要会分析、解决问题
houjjun
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原文由 wulin321(wulin321) 发表:
很多九几的标准都在用呢,标准没有想象的那么‘完美’
与想象的差的太远了
flyaway
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我的理解:GB-T是推荐的,可以根据自己的情况进行调整。
此外我以前用过nova-pak,的确是出峰比较快的。
houjjun
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原文由 flyaway(flyaway) 发表:
我的理解:GB-T是推荐的,可以根据自己的情况进行调整。
此外我以前用过nova-pak,的确是出峰比较快的。
之前参考国标做的差不了多少,没想到这次差的这么多
老多_小多
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30分钟出峰?
你的标液是按国家标准配置的么?
老多_小多
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你说饲料里结果不平行的问题,好像不是超声的问题,而是样品不均匀造成的