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主题：【资料】凝聚胺法交叉配血标准操作规程

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hxh1960

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发表于：2013/11/29 19:46:10 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

1. 原理

凝聚胺（polymatching）法首先利用低离子介质降低溶液的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，促进血清（浆）中的抗体与红细胞相应抗原结合，再加入带亚电荷的高价阳离子多聚物-凝聚胺溶液，中和红细胞表面的负电荷，缩短细胞间距，形成可逆的非特异性聚集，并使IgG型抗体直接凝集红细胞。加入中和液后，仅由凝聚胺引起的非特异性聚集，会因电荷中和而分散，而由抗体介导的特异性凝集则不会分散。

2. 标本采集：
2.1 标本种类：抽取静脉血3-4ml待凝固后分离血清，将细胞配成5％盐水悬液将供血者血样以同样方法分离血清(浆)和红细胞悬液。
2.2 标本要求：抗凝和干燥管均可，如用抗凝血主张用EDTAK2（mg/dz）抗凝标本应无溶血，切标签齐全。
3. 标本储存：急诊标本30分钟内完成操作，标本应至4℃冰箱保存7天。
4. 标本运输：室温运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染。溶血标本，标签不齐全不能作测定。
6. 试剂：
6.1 试剂名称：凝聚胺试剂(polymatching)
6.2 试剂生产厂家：(台资)珠海贝索生物技术有限公司。

6.3 试剂组成：

试剂1. 低离子介质(LowLonic Medium，LIM).试剂打开使用后，可置室温贮存，未开封者2-10度贮存，有效期为2年。
试剂2. 凝聚胺溶液(PolybreneSolution).贮存及有效期同上。
试剂3. 重悬液(ResuspendingSolution).贮存及有效期同上。
试剂4. 8.5％生理盐水。
7. 仪器：
7.1 血型血清索离心机：XTL-4.7 上海离心机械研究所
7.2 离心机：上海手术器械厂
7.3 电热恒温水箱：北京长源实验设备厂
7.4 显微镜：OLYMPUS(日本)
8. 操作步骤及结果判断：
8.1 供受者红细胞用生理盐水配成3-5％的细胞悬液。加样量均为：血清2滴，红细胞悬液1滴。主管：受血者血清+供者红细胞悬液;次管：受者红细胞悬液+供者血清;(阴阳对照管另设)。
8.2 各管分别加低离子介质0.6ml混匀置室温1分钟。加凝聚胺溶液2滴，混匀，置室温15秒。
8.3 1000g(3000rpm)，离心18秒，弃上清液，管底保留约2滴液体。轻摇
试管，观察是否形成凝块。如未形成凝块，则重做前面试验。
8.4 加入2滴重悬液，轻轻混合，肉眼或显微镜下观察结果。
8.5 凝块在1分钟内分散，试验结果为阴性，供受者血液配合;反之，如依照为不同强度的凝块，试验结果判为阳性，供受者血液不配合。实验结果必须在3分钟内判读。

9. 操作性能：快速简便，特异性强，灵敏度较高，重复性好。

10. 超出范围结果处理：
10.1 细胞自凝：在冬天气温较低时，某些病人血清中含有冷凝集素而导致交叉配血假阳性;遇此现象可用37℃-40℃生理盐水洗涤红细胞并置37℃水溶中轻轻摇动，观察结果。
10.2 若病人血清(血浆)含有肝素，如洗肾患者能影响配血，须多加4-6滴polybrene溶液以中和肝素。
10.3 红细胞悬液为5％为宜，过浓或过淡可使抗原抗体比例不适当，反应不明显易误判。
10.4 各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集，部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。
11. 方法局限性：
11.1 试管，滴管吸头和玻片必须清洁干燥，防止溶血。
11.2 操作方法应按规定，先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。
11.3 离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。
11.4 观察时应注意红细胞呈特异性凝集，继发性凝固及线状排列的区别。

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2013/11/29 19:47:29 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

该帖子于 2013/11/29 20:25:46 被 nphfm2009 删除，删除理由：占楼

2. 标本采集：
2.1 标本种类：抽取静脉血3-4ml待凝固后分离血清，将细胞配成5％盐水悬液将供血者血样以同样方法分离血清(浆)和红细胞悬液。
2.2 标本要求：抗凝和干燥管均可，如用抗凝血主张用EDTAK2（mg/dz）抗凝标本应无溶血，切标签齐全。
3. 标本储存：急诊标本30分钟内完成操作，标本应至4℃冰箱保存7天。
4. 标本运输：室温运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染。溶血标本，标签不齐全不能作测定。
6. 试剂：
6.1 试剂名称：凝聚胺试剂(polymatching)
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6.3 试剂组成：

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2013/11/29 19:50:04 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

该帖子于 2013/11/29 20:26:02 被 nphfm2009 删除，删除理由：占楼

试剂1. 低离子介质(LowLonic Medium，LIM).试剂打开使用后，可置室温贮存，未开封者2-10度贮存，有效期为2年。
试剂2. 凝聚胺溶液(PolybreneSolution).贮存及有效期同上。
试剂3. 重悬液(ResuspendingSolution).贮存及有效期同上。
试剂4. 8.5％生理盐水。
7. 仪器：
7.1 血型血清索离心机：XTL-4.7 上海离心机械研究所
7.2 离心机：上海手术器械厂
7.3 电热恒温水箱：北京长源实验设备厂
7.4 显微镜：OLYMPUS(日本)
8. 操作步骤及结果判断：
8.1 供受者红细胞用生理盐水配成3-5％的细胞悬液。加样量均为：血清2滴，红细胞悬液1滴。主管：受血者血清+供者红细胞悬液;次管：受者红细胞悬液+供者血清;(阴阳对照管另设)。
8.2 各管分别加低离子介质0.6ml混匀置室温1分钟。加凝聚胺溶液2滴，混匀，置室温15秒。
8.3 1000g(3000rpm)，离心18秒，弃上清液，管底保留约2滴液体。轻摇
试管，观察是否形成凝块。如未形成凝块，则重做前面试验。
8.4 加入2滴重悬液，轻轻混合，肉眼或显微镜下观察结果。
8.5 凝块在1分钟内分散，试验结果为阴性，供受者血液配合;反之，如依照为不同强度的凝块，试验结果判为阳性，供受者血液不配合。实验结果必须在3分钟内判读。
9. 操作性能：快速简便，特异性强，灵敏度较高，重复性好。

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该帖子于 2013/11/29 20:26:46 被 nphfm2009 删除，删除理由：占楼

10. 超出范围结果处理：
10.1 细胞自凝：在冬天气温较低时，某些病人血清中含有冷凝集素而导致交叉配血假阳性;遇此现象可用37℃-40℃生理盐水洗涤红细胞并置37℃水溶中轻轻摇动，观察结果。
10.2 若病人血清(血浆)含有肝素，如洗肾患者能影响配血，须多加4-6滴polybrene溶液以中和肝素。
10.3 红细胞悬液为5％为宜，过浓或过淡可使抗原抗体比例不适当，反应不明显易误判。
10.4 各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集，部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。
11. 方法局限性：
11.1 试管，滴管吸头和玻片必须清洁干燥，防止溶血。
11.2 操作方法应按规定，先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。
11.3 离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。
11.4 观察时应注意红细胞呈特异性凝集，继发性凝固及线状排列的区别。

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