芬戈莫德最初是由冬虫夏草(子囊菌亚门赤僵菌)培养液中提取的抗生素成分经化学修饰后合成的免疫抑制剂。芬戈莫德是鞘氨醇的结构类似物，研究显示，该药具有与其他药物完全不同的免疫抑制机制，在体内磷酸化后与位于淋巴细胞上的鞘氨醇-1-磷酸受体(S1PR)结合，通过改变淋巴细胞的趋化，促使淋巴细胞在淋巴组织内滞留，从而减少自身反应性淋巴细胞再次进入循环的几率，进而防止这些细胞浸润中枢神经系统(CNS)。进而达到免疫抑制效果。而且该过程是可逆的，停药后淋巴细胞水平即可以恢复正常。临床研究表明，口服制剂芬戈莫德针对复发-缓解型多发性硬化症疗效确切，优于目前的常用MS治疗药物干扰素β-1a注射剂(Avonex，已用于多发性硬化症的临床治疗药物)。芬戈莫德可靶向作用于对中枢神经系统(CNS)有潜在自身攻击性的淋巴细胞，促进神经保护与修复过程，降低MS的复发率，延缓损伤的进展过程，减少颅内核磁共振成像(MRI)病灶的数量，减轻病灶的严重程度。

药物及实验动物：

盐酸芬戈莫德为本所研制，实验用大鼠为Wistar雄性大鼠，6-8周龄，体重范围约200-250g/只，本所实验中心提供；大鼠代谢笼为苏州动物实验仪器厂产品。

色谱条件

色谱柱：Acquity BEH C18 (100mm×2.1mm, 1.7μm)

流动相：A：水（0.05%TFA）B：乙腈（0.05%TFA）

质谱条件

Waters LCT Premier XETM型飞行时间质谱仪，W-负离子模式；毛细管电压2200 V；锥孔电压35 V；离子源温度120℃；脱溶剂气温度350℃；脱溶剂气流量10L /h；锥孔气流量700 L /h；质量扫描范围m /z 50 ~ 1200；扫描时间0.2s。

给药方案与样品的收集：

结果与讨论：

1、经过对于给药后大鼠尿液及胆汁样品分析，初步推测盐酸芬戈莫德在大鼠体内的代谢产物有8种，其结构进一步鉴定中。

2、流动相的选择方面进行了优化。流动相的选择主要从溶剂种类和梯度洗脱设置两方面进行优化。分析方法中采用了乙腈作为有机相，原因是乙腈比甲醇具有更大的洗脱强度，从而可以减少色谱峰的展宽，得到较好的峰型，此外，使用乙腈洗脱，其粘度较低，可以减小系统压力。在水相中加入TFA，可以进一步改善化合物的峰型，减少拖尾，此外，TFA的存在还可以提高样品在离子源中的离子化效率，因此，使用乙腈-0.05%TFA水溶液为流动相梯度洗脱，可以使样品分析在 9min之内完成。

3、生物样品中含有许多内源性物质，血浆中含量较高的内源性物质主要是蛋白类成分。蛋白质在测定过程中会形成泡沫，浑浊或沉淀，有时还会与加入的试剂发生反应，从而干扰测定。蛋白还会污染仪器。如果直接进样用液相色谱分析含蛋白的体液样品，蛋白质会逐渐变性沉结在色谱柱上，导致柱效降低，柱压上升，甚至堵塞色谱柱；含有蛋白的样品如果进入离子源，会造成离子源的严重污染和损坏，降低检测的灵敏度，所以血浆样品需进行合理的前处理。常用的生物样品前处理方法有蛋白沉淀法、固相萃取法和液液萃取法。由于待测的代谢产物的极性都比较大，采用液液萃取法(溶剂用乙酸乙酯)对化合物的提取效率差，因此不宜使用。主要比较了蛋白沉淀法和固相萃取法，两种方法均能有效提取待测化合物，经过实验发现，蛋白沉淀法比较好，并且考虑到血浆样品量较少，因此选择蛋白沉淀法。

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