主题:【第七届原创】HPLC 法测定不同厂家元胡止痛片的延胡索乙素含量

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        元胡止痛片[1],理气,活血,止痛。用于气滞血瘀的胃痛,胁痛,头痛及痛经。其处方主要由延胡索和白芷组成。为了更好的控制质量,作出评价性分析,我们对不同厂家的元胡止痛片进行了分析。

    [摘  要]:目的: 建立元胡止痛片延胡索乙素HPLC含量测定方法。方法: 色谱柱Kromasil C18 )(4.6×250mm ,5μm),以乙腈-0.1%磷酸溶液(三乙胺调PH值至6.0)(39:61)为流动相;检测波长280nm,流速1.0ml/min。结果: 结果表明延胡索乙素0.0212 μg~0.1245 μg, r=0.9999,延胡索乙素平均回收率为97.8%,RSD=1.7%;结论: 本法结果简便、快速、准确。

1 仪器与试药
    岛津LC-20AT,配置四元泵、自动进样器、柱温箱、SPD-M20A检测器, LCsolution色谱工作;
瑞士梅特勒AP205(0.01mg)、赛多利斯BS124S(0.1mg)、对照品延胡索为中国食品药品检定研究院提供(批号:0726-9906),水为重蒸馏水,甲醇为色谱纯,其余为分析纯。

2 色谱条件


色谱柱:Kromasil C18 )(4.6×250mm ,5μm),检测波长:280 nm,流动相乙腈: 0.1%磷酸溶液(三乙胺调PH值至6.0)(31:69),流速:1mL·min-1,柱温:35℃, 进样量10μl。

3 方法与结果

3.1  溶液的制备

3.1.1 对照品溶液的制备:精密称取延胡索乙素10.24mg,置100ml量瓶中,加甲醇适量使溶解并稀释至刻度,摇匀即得。


3.1.2 供试品溶液的制备[2]:取元胡止痛片20片, 除去糖衣,精密称定,研细,取约10片重,精密称定,置100ml锥形瓶中,精密加入加浓氨试液-甲醇(1:20)50 ml, 称定重量,冷浸1h,加热回流 1h,放冷,称定重量,浓氨试液-甲醇(1:20)补足减失的重量,摇匀,经0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。

3.2 线性关系考察

精密吸延胡索乙素对照品5ml置50ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,按上述色谱条件,注入液相色谱仪,记录峰面积,以进样量为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y), 结果表明延胡索乙素在0.0212 μg~0.1245 μg内具有良好的线性关系,回归方程为Y = 4.04×106X+1.58×104, r = 0.9999

3. 3  精密度试验

按上述色谱条件,以对照品混合溶液连续进样5次,以峰面积计算,延胡索乙素的RSD = 0.3%

,

3.4 稳定性试验

取供试品溶液,在室温下放置,按上述色谱条件,分别在0h、2h、4h、6h、8 h、24h测定,以峰面积计算,延胡索乙素的RSD =1.2%表明供试品溶液在24h内稳定。

3.5 重复性试验

同一批元胡止痛片,按3.1.2项下方法制备供试品溶液5份,在上述色谱条件下测定,测得延胡索乙素的RSD =1.6。

3.6 回收率实验 

取已知含量的供试品5份,每份20片,按3.1.2项下方法制备供试品溶液,精密量取5ml置5个25ml量瓶中,分别精密加入上述对照品溶液5 ml,在上述色谱条件下测定,进样量20μl,计算回收率延胡索乙素的平均回收率为97.8%  RSD=1.7%,结果见表1

3.7 样品的测定

取5批供试品,按3.1.2制备供试品溶液,在上述色谱条件下进行测定,样品结果见下表2,色谱图见图1和图2.

已知样品量mg

加标量(mg

测得量(mg

回收率(%)

平均回收率(%)

RSD(%)

60.3

60

119.6

98.83 

97.81

1.70

75.4

60

134.6

98.67 

79.2

60

136.7

95.83 

82.3

60

141.4

98.50 

80.3

60

140

99.50 

76.8

60

134.1

95.50 

          表1  加样回收率实验结果

样品编号

延胡索乙素含量(ug/)

厂家1

76.64

厂家1

72.58

厂家1

73.13

厂家2

106.64

厂家3

83.58

厂家4

92.0



      表2 :不同厂家的元胡止痛片的延胡索乙素含量




                                    图1    延胡索乙素的HPLC图谱




                                                    图2  元胡止痛片的HPLC图谱

4 讨论:

4.1  提取方法选择:本研究比较了超声提取法与回流提取法对延胡索乙素含量高于超声提取法延胡索乙素含量,发现回流法延胡索乙素提取率较高。

4.2色谱条件的选择:我们采用了乙腈: 0.1%磷酸溶液(三乙胺调PH值至60)(39:61),延胡索乙素峰分离较好,保留时间适宜,故选择作为流动相,柱温分别考察了25℃、30℃、35℃,结果表明35℃柱压较小。

4.3 本文建立的方法准确可靠,可用于延胡索乙素类的含量测定,也为含延胡索乙素的制剂质量控制提供了一定的参考依据。

参考文献:

[1]国家药典委员会中国药典一部北京化学工业出版社,2005:363.

[2]
王云龙
高效液相色谱法同时测定元胡止痛片中欧前胡素、延胡索乙素与异欧前胡素的含量[J]中国医药导报, 2010,(01)58-60
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2015/1/3 23:02:44 Last edit by wangshirf 举报