主题:【分享】为什么在空白运行中,会出现待测成分的色谱峰?

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空白,一般包括两种,一种是空白溶液(溶剂);另一种是空白样品溶液,即用制备试样的方法(或生产工艺要求)制备的不含待测样品的溶液。前者是用于考察溶剂对整个检测的影响;而后者多用于考察在制备试样的方法(或生产工艺要求)的前提下,其他因素对检测的影响。如整个处理过程中pH值改变的影响,或前处理过程的影响等等。
该问题中的空白指后一种,在实验中为消除色谱分析中某些影响因素的干扰,空白与试样在同样的检测条件下分析,常常用来作为系统适用性(对照)的一个组成部分,也常常用在定量分析中,如在限量检测中有时会带入计算,作为判断样品是否合格的依据。
通常空白溶液的谱图有特定的溶剂峰或无峰,然而在某些实验中,空白溶液会出现待测成分的色谱峰,影响实验结果。实验时,如果空白溶液的谱图出现待测成分的色谱峰,会是什么原因造成的呢?
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原因
导致空白样品测定时出现待测成分色谱峰的主要原因,可分为以下几种:
①可能是由于制备空白的试剂含有待测组分,如试剂被污染,或装空白试剂的容器被污染。
②可能是仪器之前测试过同样的样品,之后系统内有测试样品的残留。这主要和温控系统、柱系统和检测系统的设置和配置有关,如设置温度不当时,上一次样品组分在仪器内会有残留,干扰后面的测定。
③ 仪器的气体、管路、气体净化器、进样口等被污染,有时空白运行时也会出现待测成分。
④ 空白样品中含性质与所测样品极相似的成分,误以为空白样品中有待测成分,如该成分保留
时间与待测样品相同等。
解决方案
空白样品溶液出现待测成分色谱峰,应按下列方法逐一检查:
首先,考虑制备用的试剂、制备过程中的样品以及盛装容器是否被污染。分析待测组分含量低的样品时,空白运行时出现的待测成分杂质会严重干扰实验结果。如果是这些原因造成的,清洗容器,重新制备,有问题的试剂需更换。
其次,要检查温控系统、柱系统和检测系统,如温度设置是否合适,选用的色谱柱是否合适等,如有问题需改变温度条件或更换色谱柱。
如果使用上面的方法仍没有解决问题,应考虑仪器的气体、管路、气体净化器、进样口等是否被污染。如要检查气体发生器的碱液有没有漏液,是否需要更换,以及气体钢瓶载气的纯度是否达到要求;检查气体净化器的分子筛、硅胶等是否需要更换或活化;同时,也要检查进样系统,如进样口隔垫、衬管、分流出口管路等是否被污染。
如果经过上面的排除方法,仍没有解决问题,那么得考虑是否是由于空白样品中含性质与所测样品极相似的成分造成的,可选择多种定性方法组合定性判断,如相对保留值定性、双柱和多柱结合等定性方法。
空白运行时出现待测成分,会影响实验结果的判断。例如,试验新方法时,一般先按照标准方法设置柱温升温程序,如实验时一个样品分析需要60min,为减少分析时间而提高升温速率,虽然分析时间减少了,但由于与固定相接触的时间也减少了,可能导致进下一个样时,在待测成分保留时间位置出现上一个样的杂质,干扰判断。另一种情况,由于温度设置不当,高沸点的组分没完全流出,而在下一次进样测定时才流出,而保留时间又刚好一致,会误导误判断。
案例分析
气相色谱法测定西药甲硝唑中的残留甲醇。色谱条件:FID检测器;5%SE-54填充柱(3m×3mm);柱温50℃,进样口温度170℃,检测器温度190℃;静态顶空手动进样,顶空温度90℃,顶空时间30min。
用二次蒸馏水配制浓度为320mg/L的甲醇溶液,甲醇标准品为色谱纯级别。先进纯的甲醇样品,确定甲醇的保留时间约为1.340min。接着,空白样品溶液顶空处理后进样,结果谱图出现很多杂质峰,且出现了与甲醇的保留时间吻合的色谱峰,见图1,多次进样,结果一样。为了查明原因,连续查看基线,30min内,未见色谱峰出现,可判断不是仪器系统内部的杂质;洗干净进样针并吹干后,将空针插在进样口处,保持5min 再拔出,连续观察30min未见色谱峰出现,由此判断不是进样针引入的杂质峰。
尝试将甲醇标准溶液顶空处理后进样,连续几次进样,除出现甲醇峰外,谱图上均有与空白样品相似的杂质峰,比甲醇还高。但是直接进纯的甲醇,谱图正常,甲醇试剂应该没问题;因为仪器的气路系统、进样系统都刚维护过,之前测定别的样品都正常,排除它们的问题;连续观察温控部分,没有问题;色谱柱刚老化过,且之前该色谱一直能正常使用,测定纯的液体甲醇正常,色谱柱没有问题。
由此判断,可能是顶空处理过程或者配制溶液时引入了杂质。这时想到,为节约实验成本,顶空瓶的塞子不是买的塞子,是从注射用的药品瓶上找的,换新的、配买的塞子的顶空瓶后,实验,空白样品溶液中的疑似甲醇峰和其他杂质峰都消失,甲醇标准品溶液测定谱图也恢复正常,见图2。
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2015/6/23 18:02:20 Last edit by carollee
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