主题:【第八届原创】PCR仪对于PCR扩增影响有多大

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  本实验室有6台PCR仪,PCR仪的使用实行签约制度。仔细观察签约本会发现一个奇怪的现象,有些PCR一天从早到晚的时间都被签得满满的,显然这台机子十分受宠,但是也有那么1台或2台则像被打入冷宫,无人问津。问周围人的原因,大家说是不好用了,具体不好用的原因多种多样,一旦出现这种问题,也就没人用这台机子了。可是,等到繁忙之际,PCR仪供不应求的时候,那些个被打入冷宫的也有人抱着试试的心里用一用,咦,竟然扩增效果十分好,于是乎又受宠起来,这样的情况在实验室屡见不鲜。对于PCR仪的选择,比这更甚的是有些人扩增片段只能使用某一台仪器,其他仪器都不好使,所谓的“PCR仪特异性”。
  之前对于前面的情况一般都是抱着一个看客的心态,最近因为要筛基因型,需要大量PCR扩增,辛辛苦苦配好P,然后做好琼脂糖胶,在点样,电泳,照胶,一步步下来,发现跑出来的带根本无法读,那个时候心里真是百感交集啊。无奈,只能重新再来。同样的体系,同样的操作,换了台PCR仪,再来一遍之后,跑出来的带就清楚了。因此,才发现选择一台好的PCR仪进行实验是多么的重要。下面两个图片是不同的PCR仪跑出的带,可以明显的看出二者效果完全不一样。那么,PCR仪到底是怎样的原理,影响它扩增效率的因素有哪些呢,又是如何判断一台机子的好坏呢?为了避免下次再做无用功,于是,专门查了相关的PCR仪知识和大家一起分享一下。

  首先,了解PCR原理是必然的,这个分子生物学和遗传学的老师估计都讲了N多遍了,也就不重复了。PCR仪则是实现对温度的变化要求,为PCR反应提供PCR发生的适宜条件。判断一台PCR仪的好坏可以从三个方面,一是升温降温速度,二是温度控制,三是使用寿命。升降温和温度控制与PCR仪材料的导热性和感温性密切相关,也可以说PCR仪拼的是材料。
  当然,PCR仪的维护与保养也十分重要,那些曾被打入冷宫后又受宠的机子可能的原因是忽视了维护与保养这一项。一台配置再好的PCR仪如果连续工作运转,也会有疲惫的一天,那时机器则会出现问题。在日常使用中要注意定期清洗样品池,热盖,仪器外表面,更换保险丝,最好半年检测一次,温度检测时,发现各孔平均温度差偏离设置温度大于1至2度是,可以运用温度修正法纠正PCR实际反应温度差。
PCR仪虽然不能改变实验结果,但是会影响实验效率,所以在使用的时候也应该留心一下,避免重复做无用功了。
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dooby
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happy美丽
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仪器时而受宠,时而被打入冷宫的情况,除了与定期的维护保养有关系,会不会还与仪器的稳定性有关系?
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2015/8/1 11:23:47 Last edit by dyann