主题:【原创】Agilent HPLC ChemStation 自动积分及积分参数的设置

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一片枫叶
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积分参数的设置在积分运算中起着很重要的作用,不同的积分参数设置会有不同的积分结果,那么如何自动积分及设置积分参数呢?为了方便学习了解这里做了一些汇总以便于参考。

      点击“积分”菜单中的“积分事件”,或者单击上图所示的快捷图标,即可打开积分事件表,进行积分参数的修改和设置,或添加时间性的积分事件。
肩峰:处理方式可选择“关闭”,“斜滑(按切线方式分离肩峰)”,“垂直(按垂直方式分离肩峰)”,
      注意:“斜率灵敏度”和“峰宽”的数值改动要慎重,因为选择不同的数值,将影响峰起止点的识别,得到不同的峰面积,进而影响到所得定量结果的准确性,一定要保证处理同一系列数据这两个参数值是一致的。
      “最小面积”和”最小峰高”是色谱峰的判断依据,其数值大小不会影响所得峰面积。

      点击”积分”菜单下的“自动积分命令,或点击上图所示的自动积分图标,化学工作站即以当前色谱图为基础,自动优化积分事件表中的积分参数,如果自动积分的结果不能够满足要求,可以自行设置积分参数,重新积分。
      请注意:”自动积分”执行的是在所调用的色谱图为基础优化方法参数的作用,针对不同的色谱图自动积分的结果都是有区别的,千万不要每条出一张色谱图都执行自动积分。

      点击数据分析界面中左上脚第一个图标,切换到积分界面,在积分事件表打开的状态下,可以看到上图所示的各种快捷图标,通过添加删除积分事件可以进一步优化积分。
快捷图标,具体含义如下:
1:设置“基线连到此点”
2:设置”基线维持”
3:设置”拖尾峰撇去”
4:设置”积分开关”
5:设置”积分灵敏度”
6:设置”最小峰面积”
7:设置”固定峰宽”
8:设置”检测肩峰”开关
此外,使用窗口右侧的所有可用的积分事件快捷下拉菜单可以方便快捷的找到所有可用的积分事件。
可添加的时间性积分参数(积分时间表打开的状态下)
      使用窗口右侧的所有可用的积分事件快捷下拉菜单可以方便快捷的找到所有可用的积分事件。请掌握”基线连到此点”,“谷底基线”及”积分器开启/关闭”等功能。

在积分时间表中的六个积分参数适用于所用信号。


具体的各个参数含义见下文的示意图。
      “拖尾峰撇去高度比”等于基线修正后的母峰高(Hp)与子峰高(Hc)之比。该比值必须大于用户规定的阈值,才可以进行拖尾撇去处理,如果整张色谱图上都不需要进行拖尾撇去处理,您可以将拖尾撇去处理高度比的阈值设为零或者设为一个极高的数值,默认值为零,即不进行撇去处理。
      “前伸峰撇去高度比”等于基线修正后的母峰高(Hp)与子峰高(Hc)之比。该比值必须大于用户规定的阈值,才可以进行拖尾撇去处理,如果整张色谱图上都不需要进行拖尾撇去处理,您可以将拖尾撇去处理高度比的阈值设为零或者设为一个极高的数值,默认值为零,即不进行撇去处理。
      撇去峰/谷比等于基线修正后的子峰高(Hc)与峰谷高度(Hv)之比。该比值必须小于用户规定的阈值,才可以进行拖尾峰撇去处理。

      是否需要进行子峰撇去是由软件根据用户设置的三个参数自动进行检测的,进行了前伸或拖尾峰撇去后的主峰会用R标识出来,表明该峰的峰面积是经过重新计算的(撇去处理是在积分完成之后的后处理),是否进行撇去处理是由两个参数决定的:”拖尾峰撇去高度比”和”撇去峰/谷比”。
这两个参数用于衡量是否对母峰之后的子峰进行拖尾撇去处理,另外,如果使用了时间性的积分事件,规定进行指数曲线拟合撇去或者母峰本身是别的峰的字峰,那么就不会进行撇去处理。
      “拖尾峰撇去高度比”等于基线修正后的母峰高(Hp)与子峰高(Hc)之比。该比值必须大于用户规定的阈值,才可以进行拖尾撇去处理,如果整张色谱图上都不需要进行拖尾撇去处理,您可以将拖尾撇去处理高度比的阈值设为零或者设为一个极高的数值,默认值为零,即不进行撇去处理。
撇去峰/谷比等于基线修正后的子峰高(Hc)与峰谷高度(Hv)之比。该比值必须小于用户规定的阈值,才可以进行拖尾峰撇去处理。默认值为20.
      注意:如果两个标准没有同时满足,则第一个子峰后面的一系列子峰都将不进行撇去处理,将直接使用垂线分离的方式进行积分。

      前伸峰的处理方式与前面所述的拖尾峰撇去处理的方式相同,是由软件根据用户的参数设置自动完成的。
      此时使用的参数是前伸峰撇去高度比和撇去峰/谷比。
      “前伸峰撇去高度比”等于基线修正后的母峰高(Hp)与子峰高(Hc)之比。该比值必须大于用户规定的阈值,才可以进行拖尾撇去处理,如果整张色谱图上都不需要进行拖尾撇去处理,您可以将拖尾撇去处理高度比的阈值设为零或者设为一个极高的数值,默认值为零,即不进行撇去处理。
      撇去峰/谷比等于基线修正后的子峰高(Hc)与峰谷高度(Hv)之比。该比值必须小于用户规定的阈值,才可以进行前伸峰撇去处理。默认值为20.

      切线撇去模式:当满足了前文所述的前伸峰或拖尾峰撇去处理的条件时,化学工作站将进行撇去处理,使用”切线撇去模式”即可规定撇去处理时对前伸或拖尾的峰如何进行撇去,详细图示说明见下图及说明。
      峰谷比:两个没有基线分离的峰中,较小的峰的峰高与峰谷高度的比值就是峰谷比。
      使用这一参数用户可以规定两个没有基线分离的峰使用垂线分离方式积分还是使用基线链接到峰谷的方式积分,化学工作站会自动计算没有基线分离的峰中最小的峰的峰高与峰谷高度的比值,得到峰谷比的数值。如果所得峰谷比的数值小于您的设定值,则使用垂线分离的方式,将两个色谱峰分离,进行积分。如果所得峰谷比的数值大于设定值,则使用峰谷方式积分,即从第一个峰起点向峰谷处画基线,并从峰谷处第二个峰止点画基线,对这两个没有基线分离的色谱峰进行峰谷积分。
峰谷比的计算方式如下:
当H1≥H2时,峰谷比=H2/Hv
当H1≤H2时,峰谷比=H1/Hv
(H2,H1分别为两个没有基线分离的峰的高度,Hv为峰谷的高度)
注意:只有当基线校正模式选择了高级模式时峰谷比才会生效。

      “直线”模式:直线模式和上述的标准模式里的直线拟合很相似,也是将子峰的起点和终点用直线直接连接,但是子峰起点的高度没有根据母峰的斜率进行修正。撇去线下方的面积将从子峰中扣除,加到母峰面积中。
      “标准”模式:使用标准模式时,指数曲线和直线计算结合起来,为母峰和字峰提供最佳拟合。子峰的起点和终点之间将用直线或指数曲线连接起来,撇去线下方的面积将从子峰面积中扣除,加到母峰的面积中。
      “指数”模式:使用指数曲线拟合模式时,将使用指数方程拟合母峰的拖尾曲线,撇去线穿过一个或多个母峰后的子峰,撇去线下方的面积,将从子峰面积中扣除,加到母峰面积中。可以同时利用一个撇去曲线撇去多个子峰。第一个子峰之后的所有子峰之间用垂直直线的方式分割,单独计算峰面积。

      基线校正:化学工作站进行积分的时候,经常会出现基线渗透的情况,即所画的基线穿过了色谱峰本身的曲线,给出了一部分负的峰面积,尤其是用户使用了”峰谷处画基线”的功能时,经常出现这一情况。
      经典模式:该方式与用与A版化学工作站的基线跟踪方式相同,自动向后画基线。
      无贯穿模式:当选择这种方式时,工作站将自动收索基线渗透的位置,并将峰的起点和终点向峰的顶点方向移动,直至没有基线渗透。移动时,先移动峰的起点至无贯穿发生,再移动峰的终点,注意:基线的无贯穿不适用于溶剂峰及其子峰和肩峰。
      高级模式:在高级基线跟踪模式下,积分器会自动调整峰的起点和终点位置,为峰族重新绘制基线,去除基线渗透。多数情况下,这种模式可以给出更好更稳定的基线,基线对斜率灵敏度的参数设置依赖性较小,使用这种模式时将用到另一个参数”峰谷比”。该参数是用于决定两个没有分离的色谱峰采用垂线分离还是采用峰谷基线的方式积分。该参数可以有用户自己设定阈值。

      “峰谷比”(当基线校正的模式选择为高级模式时,此参数才生效)
      通过设定峰谷比参数,用户可以决定对两个没有实现基线分离的色谱峰进行垂线分离积分还是进行峰谷基线积分,积分器将自动计算基线修正后的较矮峰的峰高和峰谷高度的比值,如果该比值低于用户设定的阈值,将使用垂线分离的方式对这两个色谱峰进行积分,如果该比值高于用户设定的阈值,则将使用向峰谷处画基线的方式进行两个色谱峰的积分,见上图。

      注意:积分事件表中的积分参数并不是孤立于方法的参数,它们属于方法的一部分内容,所以保存积分参数时应先将积分事件保存到方法中,然后,再保存方法,积分参数就会被保存下来。
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原文由 夏天的雪(bingwang228) 发表:
非常详细了,对数据处理帮助很大
希望写有所用
夏天的雪
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原文由 一片枫叶(v2960432) 发表:
希望写有所用
对选项参数写的非常详细,用处很大
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原文由 夏天的雪(bingwang228) 发表:
对选项参数写的非常详细,用处很大
不知其它工作站是否也有着同样的积分机理
bxy1978
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原文由 一片枫叶(v2960432) 发表:
不知其它工作站是否也有着同样的积分机理
部分参数应该是差不多的
huacai
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这正是我需要学习的东西,请问收藏的这篇文章,下次怎么快速找到呢
一片枫叶
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这正是我需要学习的东西,请问收藏的这篇文章,下次怎么快速找到呢
嘿嘿~~这是一个都知晓的秘密~~
symmacros
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非常详细的工作站数据设置介绍,感谢分享。
valorb
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用好积分参数,以后就不用手动积分了