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凝胶色谱（GPC）
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主题：【讨论】关于凝胶色谱（GPC）的方法可行性讨论

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若如初见147
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发表于：2015/12/21 14:00:08 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
各位朋友们，我的课题是分离检测陈酿红酒中的聚合色素。
在色素检测的领域，常规的是HPLC（MS），采用C18反相色谱。但只是对单体花色苷和寡聚花色苷有好的效果。聚合度提升（花色苷，黄酮类物质的互相聚合物）导致色谱分离效果下降，显示出的是一大块不能分开的大峰（hump）。这是现在问题的瓶颈所在。
因为聚合色素的分子量一般都在1000以上，所以想试一试凝胶色谱的分子筛效应筛选，但是我之前没有做过分子筛，对之很不熟悉。所以想请各路朋友探讨一下方法的可行性。
下面是我针对凝胶色谱的几个疑问，希望有经验的朋友帮我解答：、
1，凝胶色谱是一个配备有特殊检测器和别的装置的大型仪器吗？还是只是色谱柱是凝胶色谱柱？如果将HPLC（MS）的色谱柱更换为凝胶色谱柱，是不是就达到了凝胶分离的效果，操作上可不可行？
2，因为聚合色素的结构复杂，同分异构体也会很多，我自认将其每个分离纯化出来都是不可能的工作。而且，因为凝胶色谱的分离只能达到将不同水力半径的物质分离的目的所以，其最终的分离效果如何仍然未知，望有经验的朋友指点一二，不胜感激！
3，我认为，聚合色素分离的关键在于色谱柱，只有符合聚合色素物理化学特性的色谱柱才能解决分析检测的能力。希望有详细介绍和讲解色谱柱技术的朋友不吝分享一下资源，小弟QQ邮箱为543351984@qq.com，万分感激！
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小不董
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2015/12/25 7:43:39 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可以选择分离分子量小的柱子试一试，但是Hplc MS也不容易定性呀
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若如初见147
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2015/12/28 15:38:21 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 小不董(doxw0323) 发表:
可以选择分离分子量小的柱子试一试，但是Hplc MS也不容易定性呀
感谢您的建议。 最近看到的一篇类似的文献结果很可能是这样（附图），所以我想试试两根色谱柱串联（凝胶色谱+C18)，然后接质谱试试，不知道技术上能不能做到？
附件：
可能色谱结果.docx
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小不董
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2015/12/28 16:05:31 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 若如初见147(v2927546) 发表:
感谢您的建议。 最近看到的一篇类似的文献结果很可能是这样（附图），所以我想试试两根色谱柱串联（凝胶色谱+C18)，然后接质谱试试，不知道技术上能不能做到？



将你的图传上来，更直观。
但你说的凝胶色谱和C18柱子串联，效果可能不是你想象的那样，凝胶色谱是要求样品在柱子中没有作用的， 只有体积排阻作用的。而C18柱是有作用的
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若如初见147
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2016/1/5 10:05:34 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 小不董(doxw0323) 发表:

将你的图传上来，更直观。
但你说的凝胶色谱和C18柱子串联，效果可能不是你想象的那样，凝胶色谱是要求样品在柱子中没有作用的， 只有体积排阻作用的。而C18柱是有作用的
感谢你的回复。我是这样想的，首先通过排阻色谱的作用按分子量由大到小洗脱出来，再进入C18色谱柱。因为聚合色素分子量大小只由聚合度决定，而连接一个聚合单元则分子的极性就会改变，说不定会在C18上得到好的分离效果。不知道我说的有没有道理？

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若如初见147
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2016/1/6 9:38:48 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 小不董(doxw0323) 发表:

将你的图传上来，更直观。
但你说的凝胶色谱和C18柱子串联，效果可能不是你想象的那样，凝胶色谱是要求样品在柱子中没有作用的， 只有体积排阻作用的。而C18柱是有作用的
感谢你的回复。我是这样想的，首先通过排阻色谱的作用按分子量由大到小洗脱出来，再进入C18色谱柱。因为聚合色素分子量大小主要由聚合度决定，而连接一个聚合单元则分子的极性就会改变，说不定会在C18上得到好的分离效果。不知道我说的有没有道理？
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小不董
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2016/1/6 15:23:07 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 若如初见147(v2927546) 发表:
感谢你的回复。我是这样想的，首先通过排阻色谱的作用按分子量由大到小洗脱出来，再进入C18色谱柱。因为聚合色素分子量大小主要由聚合度决定，而连接一个聚合单元则分子的极性就会改变，说不定会在C18上得到好的分离效果。不知道我说的有没有道理？

经过凝胶色谱柱后，是按照分子量大小出峰了，但再经过碳18柱子后，又将重新打乱，根据其键结合出峰了，谁也不知其出峰时间是怎么的。
而且凝胶色谱出来的，分子量大小相差一个数量级也就最多相差1min算好的了，经过碳18柱效应后，改变其保留时间很容易。
不过你也可以尝试下，有时选择柱子也靠运气的。
祝你好运
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