主题:【第九届原创】茶叶儿茶素组分液相方法开发的心酸历程

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Greenpiner
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8月三等奖
        这是一个心酸的历程!
        话说为了配合高校学术研究,公司领导要求我们能够检测茶叶中儿茶素组分。前提是现有资源的情况下,一星期内完成方法开发(此处挖一坑- -!)。于是马上行动翻阅标准,发现用国标做以不现实,因为除了设备条件符合,标样具备外,其他试剂药品基本不全。没办法另行他道,还好其他方法中所用试剂种类较少,都是常用试剂,现有资源都满足,可以开工嘞。
      第一步:配制标样。
      茶叶中儿茶素组分含量一般在1%-12%,每种单标纯物质只有25mg,考虑到最后做的线性浓度比较大,直接配制混标(此处又一坑- -!)。混标中包括7中成分(儿茶素:GA、EGC、C、EGCG、EC、ECG及咖啡碱)。
      第二步:液相方法的建立
      根据相应文献,设定了检测波长、进样量、柱温、流速、流动相梯度。一切都是那么的自然,顺利!开始走样。图谱如下:

          怎么比标准中出峰时间提前这么多?打开柱温箱一看

            4.6×150mm、忘记确认柱子长度了,标准中用的是250mm的柱子。这就合理了,提前就提前只要分离效果好就OK,瞬间释然。开始数峰,1,2,3,4,5,6,7,很好刚好七个峰。自然的开始进行重现性和线性的测试,重现性很好,线性除了第一个峰差点其他基本都能达到三个九。自我感觉很良好,于是乎开始走单标确认每种成分的保留时间。(杯具即将上演)
      2.246(GA)、5.193(EGC)、6.515(C)、11.001(CAF)、12.574(EGCG)、12.576(EC)、16.290(ECG)。咦,什么鬼,EGCG和EC怎么在一起?1.535到底是什么鬼?难道EGCG和EC中我只配了一个?
      于是EGCG和EC重新配过再进,结果还是这样!莫不是标准品错了?好吧当我没问。。。再想想,我好像忽略了什么,于是进了针空白,1.535是溶剂,是溶剂,是溶剂。我居然忘了溶剂峰,如此低级的错误,瞬间感觉自己变成了
      既然确定了1.535这鬼,也就是说EGCG和EC并没有分离开,必须想办法让两个峰分离。
    方法一:调节流动相比例。各种调企图达到分离的目的,结果:失败。
    方法二:降低流速,延迟分析时间,结果:失败。
    方法三:降低柱温+流速+流动相比例,结果:失败。
    方法四:更换流动相,将乙腈改为甲醇,结果:咦,有门。如图:
甲醇做有机流动相
      于是开始心里各种总结,甲醇粘性比乙腈大,相同流速下虽然柱压变高,出峰时间推后,但能起到很好的分离效果。,然而,为毛线还是6个峰。我的内心是崩溃的。再进单标确认,what?这次变成EGC和C重叠在14.679。我想静静。。。
    用上面的三个方法进行调试,企图达到分离的效果,但还是被残酷的现实打败了。
    用乙腈前面两个分离效果好,用甲醇后面两个分离效果好。那么我前半用乙腈后半用甲醇呢?马上测试,上图:
前面少量乙腈后面大量甲醇
      哇哈哈!天才。再用前面的方法一,方法二,方法三进行调戏,哦不,调试!最终达到分离的效果。如图:
最终效果
      1,2,3,4,5,6,7七个小矮人,一个都不少,重新测试重现性及线性。重现性良好,线性轻轻松松三个九、四个九。
      整个过程历时5天,在领导规定的时间内完成,瞬间感觉如释重负!
  PS:处子作献给广大仪友。
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Insm_e53d6cb6
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我想问下你有没有写实验方案啊,可以看看吗?
vm88
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yrp1987
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原文由 Greenpiner(v2900054) 发表:
拿去参考吧
进样过程中乙腈甲醇的切换,应该会造成压力波动,会存在流动相过渡的问题,不知道这个会不会有影响

nixiaolong
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原文由 夏天的雪(bingwang228) 发表:
串联色谱柱是否就是待测组分的二次分离?还有,色谱柱串联后可能会提高分离,但是是否会出现出峰时间延后,峰型变差呢?请教一下
串联色谱 我们食品检测很少 不过我们这边药品检测遇到 据分析过的老师讲 可以提高分离度,峰型可以接受。
夏天的雪
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原文由 nixiaolong(nixiaolong) 发表:
应该还行 两根250mm 4.6*5.0,10%甲醇 40度柱温 的一般不超过15mpa
串联色谱柱是否就是待测组分的二次分离?还有,色谱柱串联后可能会提高分离,但是是否会出现出峰时间延后,峰型变差呢?请教一下
夏天的雪
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原文由 zyl3367898(zyl3367898) 发表:
改变流动相会使峰分离,好办法。
和气相中改变升温程序差不多
夏天的雪
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原文由 nixiaolong(nixiaolong) 发表:
第一个峰是溶剂峰 为什么能做出线性? 难道是lz 是通过改变进样体积来做线性的?
如果稀释液中没有该溶剂,那么该溶剂峰也可能做出线性来的
夏天的雪
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原文由 nixiaolong(nixiaolong) 发表:
应该还行 两根250mm 4.6*5.0,10%甲醇 40度柱温 的一般不超过15mpa
没有试过两根串联的方法,总是担心压力问题。15mpa压力适中,可以一试
nixiaolong
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原文由 夏天的雪(bingwang228) 发表:
串联色谱柱压力会不会超
应该还行 两根250mm 4.6*5.0,10%甲醇 40度柱温 的一般不超过15mpa
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2016/9/24 8:51:44 Last edit by nixiaolong
夏天的雪
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原文由 nixiaolong(nixiaolong) 发表:
哦,lz有没有考虑过使用两个柱子串联做
串联色谱柱压力会不会超