主题：【分享】不堪回首的食品防腐剂测定方法。。。

随着食品工业的发展，食品防腐剂已成为加工食品不可缺少的物质。同时，食品防腐剂的安全性问题也成为公众关心的社会热点，有效的检测方法是对其进行监测控制的必要手段。现代社会对于检测方法的要求是有效、便捷、快速，并且有较高的灵敏度和良好的重现性。科技的发展，使得越来越多的仪器被用于防腐剂的检测。如，高效液相色谱、气相色潜、毛细管电泳、离子色谱及近年来发展迅速的液相色谱串联质谱。理想防腐剂的检测方法必须能够在各式各样复杂的食品基质中准确检测出防腐剂的种类及含量；其中最为理想的方法应该能够同时对多种防腐剂进行检测。

对防腐剂的使用必须控制一定的使用量，而且应具备以下特点

（1）凡加入食品中的防腐剂，首先是对人体无毒、无害、无副作用的；
（2）长期使用添加防腐剂的食品，不应该使机体组织产生任何的病变，更不能影响第二代发育、生长；
（3）加入防腐剂之后，对食品的质量不能有任何的影响和分解；
（4）食品加入防腐剂之后，不能掩蔽劣质食品的质量或改变任何感官性状。
我国允许使用的防腐剂有苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、对羟基苯甲酸乙酯及丙酯等。其中前两种应用广泛。
苯甲酸及其盐类使用范围：
酱油、醋、果汁类、果酱类、葡萄糖、罐头，最大使用剂量1g／公斤；汽酒、汽水、低盐酱菜、面酱类、蜜饯类、山楂糕、果味露，每公斤最多使用0.5g。
山梨酸及其盐类在酱油、醋、果酱类中，每公斤最多允许使用1g；对低盐酱菜类、面酱类、蜜饯类等使用0.5g/kg。
苯甲酸随食品进入体内时与甘氨酸结合成马尿酸，从尿液中排出体外，不再刺激肾脏；山梨酸进入机体后参与新陈代谢，最后生成CO₂和H₂O，被排出体外，由于山梨酸及其盐类价格贵一般不常用，多数用在出口食品中。
苯甲酸又名安息香酸，为白色有丝光的鳞片或针状结晶，熔点122℃，沸点249.2℃，100℃开始升华。在酸性条件下可随水蒸汽蒸馏，微溶于水，易溶于氯仿、丙酮、乙醇、乙醚等有机溶剂，化学性质较稳定。
苯甲酸钠易溶于水和乙醇，难溶于有机溶剂，与酸作用生成苯甲酸。
山梨酸为无色、无臭的针状结晶，熔点：134℃，沸点：228℃。山梨酸难溶于水，易溶于乙醇、乙醚、氯仿等有机溶剂，在酸性条件下可随水蒸汽蒸馏，化学性质稳定。
山梨酸钾易溶于水，难溶于有机溶剂，于酸作用生成山梨酸。苯甲酸与山梨酸两种防腐剂主要用于酸性食品的防腐。
一.苯甲酸及其盐类的测定
测定方法：
（1）中和法（碱滴定法）——应用广泛；
（2）紫外分光光度法；
（3）薄层层析法；
（4）气象色谱法；
（5）高压液相色谱法；
（一）中和法
1.原理
在弱酸条件中，用乙醚将样品中的苯甲酸提取出来，将乙醚挥发后，用中性酒精或醇醚混合物溶解内容物，用酚酞做指示剂，采用0.1N标准N_aOH滴定至终点，然后根据氢氧化钠消耗的体积计算苯甲酸或苯甲酸钠的含量。
2.试剂
3.样品的处理
（1）固体或半固体样品（各种果酱）
称100g样→与500mL容量瓶中→加200mL水→加ARNaCl直到不溶解为止（降低苯甲酸在水中溶解度）→用10%NaOH调为碱性（这时苯甲酸生成苯甲酸钠，并以苯甲酸钠状态存在）→用饱和NaCl定容500mL→静置2小时→过滤→弃去初液→收集滤液
（2）含酒精样品（各种汽饮料等）
取250mL样→于烧杯中→加10%NaOH呈碱性→置水浴蒸发至100mL（除去C₂H₅OH）→移入250mL容量瓶→加30gNaCl溶解后→用饱和NaCl定容→放置2小时→过滤→收集滤液
（3）含多量脂肪样品
于上述制备好的滤液中→加NaOH使之成为碱性→加50mL乙醚提取→静置分层后→弃去醚层→溶液供测定用
4.操作方法　
吸滤液100mL→于500mL分液漏斗→加1:1HCl 5mL酸化→用150mL乙醚分三次提取→每次振荡不能太激烈以防乳化→合并醚层→连接蒸馏装置→回收乙醚（50℃水浴）→用10mL中性乙醇+10mL水溶解残渣→加2滴酚酞→用0.1NNaOH滴出微红色（同时要求做空白实验）。
5.计算
苯甲酸含量%=(N·V×0.122/W)×100= (N·V×0.1441/W)
N:标准氢氧化钠的浓度
V:标准氢氧化钠消耗的体积
W:样品重量
0.122:1mL 0.1N氢氧化钠约等于苯甲酸的克数；
0.1441:1mL 0.1N氢氧化钠约等于苯甲酸钠的克数；
采用此方法测苯甲酸及其盐类最大缺点是：
样品中有其它有机酸时，乙醚萃取时易带过来，所以此法测定误差较大。
（二）紫外分光光度法
样品中苯甲酸在酸性溶液中可以用水蒸汽蒸馏的方法蒸馏出来，与样品中不挥发性成分分离，然后用强酸氧化，使苯甲酸以外的其它有机物氧化分解，氧化后的溶液再次蒸馏，蒸馏液中除苯甲酸外的其它杂质基本都被分解了，根据苯甲酸的吸收波长225nm下测定消光值。样品中加1mL磷酸经水蒸汽蒸馏，得到的馏液主要是苯甲酸，还有其它酸物，再加入0.2N的K₂Cr₂O₇和4N的H₂SO₄，将其它酸性物质氧化，再经过蒸馏，得到无杂物的苯甲酸，在225nm下测定。
苯甲酸用紫外的原因是甲酸同苯形成p-π共轭体系，适合紫外分光光度仪测定。
此实验要求做空白，空白中不加磷酸，因苯甲酸在碱性溶液中不能被蒸馏出来的特点（样品+1NNaOH5ml）→蒸馏苯甲酸（g/kg）=C / W*1000
（三）薄层层析法
原理：样品经过酸化后，用乙醚提取苯甲酸，然后将样品浓缩，浓缩后点样于聚酰胺薄层板上，经展开，显色后，根据比移值与标准比较定性，并进行定量。
（四）气相色谱法
原理：用乙醚提取后，采用氢火焰离子检测器进行分离测定，然后与标准系列比较定量。
（五）高压液相色谱法
原理：样品处理后，注入高效液相色谱仪中，利用被测组分在固定相和移动相中分配系数的不同，使被测组分分离，用紫外检测器在特定波长下测定被测组分的吸光度，与标准比较定性和定量。
二.山梨酸及其盐的测定
测定方法：
（1）比色法（硫代巴比妥酸比色法）
（2）紫外分光光度法
（3）薄层层析法
（4）气相色谱法
（5）高压液相色谱法
硫代巴比妥酸比色法
1.原理
样品中的山梨酸在酸性溶液中，用水蒸汽蒸馏出来，然后用K₂Cr₂O₇氧化成丙二醛和其它产物，丙二醛与硫代巴比妥酸反应，生成红色物质，颜色的深浅与山梨酸含量成正比。（530nm下测定）
2.操作方法
（1）样品制备
称取100g左右的样品→加蒸馏水250mL→在高速捣碎机上打浆→定容500mL→过滤→收集滤液
（2）山梨酸的提取
准确吸取两份滤液各20mL→分别放入两个250mL蒸馏瓶中→一个瓶加1mL磷酸、无水硫酸钠20g、水70mL、玻璃珠3粒→另一瓶加1N NaOH 5mL、无水硫酸钠20g、水70mL、玻璃珠3粒→蒸馏→分别用装有10mL 0.1N NaOH的100mL容量瓶接收馏液→当馏液收集到80mL停止蒸馏，用少量水洗涤冷凝管→定容→分别吸10mL溶液→分别置于两个100mL容量瓶→用0.01N NaOH定容→供样液、空白测定用；
（3）测定
准确吸样液、空白液2mL→于25mL比色管中→加水3mL→加2mL（K₂Cr₂O₇+硫酸）混合液→在100℃水浴5分钟→加0.5%硫代巴比妥酸2mL→沸水浴加热7分钟→冷却→定容→于1cm比色杯在530nm处比色；
（4）标准曲线绘制；
小贴士：学习生物的三个小技巧


1.掌握基本知识要点，“先记忆，后理解”
与学习其它理科一样，生物学的知识也要在理解的基础上进行记忆，但是，高中阶段的生物学还有着与其它理科不一样的特点。
对于大家学习了许多年的数学、物理、化学来说，这些学科的一些基本思维要素同学们已经一清二楚，比如：数学中的未知数X 、化学中的原子、电子以及物理中的力、光等等。而对于生物学来说，同学们要思考的对象即思维元素却是陌生的细胞、组织、各种有机物和无机物以及他们之间奇特的逻辑关系。因此同学们只有在记住了这些名词、术语之后才有可能掌握生物学的逻辑规律，既所谓“先记忆，后理解”。

2.弄清知识内在联系，“瞻前顾后”、“左顾右盼”
在记住了基本的名词、术语和概念之后，同学们就要把主要精力放在学习生物学规律上来了。这时大家要着重理解生物体各种结构、群体之间的联系，也就是注意知识体系中纵向和横向两个方面的线索。
如，关于DNA，我们会分别在“绪论”、“组成生物体的化合物”和“生物的遗传和变异”这三个地方学到，但教材中在三个地方的论述各有侧重，同学们要前后联系起来思考，既所谓“瞻前顾后”。又如：在学习细胞的结构时，我们会学习许多细胞器，那么这些细胞器的结构和功能有何异同呢？这需要大家做了比较才能知道，即，所谓“左顾右盼”。

3.深刻理解重点知识，读书做到“六个W”
对于一些重点和难点知识，大家要深刻理解。如何才能深刻理解呢？大家读书时要时时思考“六个W”。这六个W分别是：
Who—→谁或什么结构；
What—→发生了什么变化或有什么；
How—→怎样发生的；
When—→什么时间或什么顺序；
Where—→在什么场所或结构中发生的；
（来源：百度文库）