主题:【第十届原创】关于《GB/T 22338-2008 动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定》的方法确认

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                                                              关于《GB/T 22338-2008 动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定》的方法确认
        按照《检验检测机构资质认定评审准则》的要求,实验室需要对选定的检测方法进行方法确认,方法确认的目的就是为证实使用的方法能够满足预期用途。笔者参考《GB/T 27404-2008 实验室质量控制规范 食品理化检测》的内容进行《GB/T 22338-2008 动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定》的方法确认,并对检测方法确认的相关技术要求与大家进行交流探讨。

一、明确标准使用范围
      本标准适用于水产品、畜禽产品、畜禽副产品,那就意味着本次方法确认要在此三类产品范围内进行,超出范围的方法确认无任何意义。

二、明确方法中对于检测方法的限制
      在本方法中,第二法液相色谱-质谱/质谱法贴近于日常检测。因此,如用液质仪器进行日常检测,那则我们做第二法的方法确认资料。
三、方法确认记录
1、液相和质谱条件
      在优化氯霉素类液相条件时,发现一级水对目标物的响应影响非常大,一级水最好现用现配,每天都进行更换。我们实验室发现不同的一级水响应的高低有以下规律:哇哈哈纯净水>屈臣氏水>密理博一级水。
同时在优化质谱条件上,降低干燥气的温度,降低质谱Q1分辨率也能够明显提高目标物的响应。
      色谱条件
a. 色谱柱:Agilent EclipsePlus C18 2.1mm*50mm,1.8 μm。
b. 柱温:40℃
c. 流动相及其梯度
A:一级水  B:甲醇     

时间

A(%)

B(%)

Flow(mL/min)

0.00

90

10

0.4

1.00

90

10

0.4

2.00

2

90

0.4

2.50

2

90

0.4

2.51

90

10

0.4

3.50

90

10

0.4


    d. 进样量:5μL
  4.2 MS仪器参数
    模式:ESI(-)

    Gas Temp :200 ℃
    Gas Flow :6 l/min

    Nebulizer;35psi
    Sheath Gas Temp:400℃

    Sheath Gas Flow :11 l/min
    Capillary:3500V
Nozzle Voltage:500V

采集离子

化合物

母离子

子离子

驻留时间

提取电压

碰撞能量

加速电压

氯霉素

321

152

50

130

15

3

氯霉素

321

257

50

130

7

3

甲砜霉素

354

185

50

130

10

3

甲砜霉素

354

290

50

130

20

3

氟甲砜霉素

356

185

50

120

10

3

氟甲砜霉素

356

336

50

120

5

3


2、专属性验证
①试剂空白试验:不称取样品,按照流程对试剂进行处理后进样测定。
②样品空白试验:称取阴性样品,按照流程对样品进行处理后进样测定。
③加标回收试验:称取阴性样品,添加一定浓度的氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素标准液,按照流程对样品进行处理后进样测定。
                                                                                   
                                              氯霉素阴性样品色谱图                                                                        氯霉素阳性样品色谱图
                                                                                     
                                            甲砜霉素阴性样品色谱图                                                                    甲砜霉素阳性样品色谱图
                                                                                     
                                        氟甲砜霉素阴性样品色谱图                                                                    氟甲砜霉素阳性样品色谱图
3、方法检出限/定量限确定
    根据标准规定检出限计算仪器信噪比是否达到>3,或根据定量限计算仪器信噪比是否达到>10。
                                               
        根据谱图显示的信噪比对检出限进行确定
                                     
                                                                        氯霉素0.1μg/L色谱图,信噪比S/N=424.1,如图所示
                                       
                                                                        甲砜霉素0.1μg/L色谱图,信噪比S/N=32.2,如图所示
                                       
                                                                            氟甲砜霉素0.1μg/L色谱图,信噪比S/N=127.6,如图所示
4、线性
    选取尽量覆盖一个数量级的5个线性点,并使相关系数不低于0.99,但通常情况下不低于0.995 。
    如图所示,下结论。
                                             
                                         
                                                                                      氯霉素在0μg/L~2μg/L浓度范围内线性曲线
                                         
                                                                                甲砜霉素在0μg/L~2μg/L浓度范围内线性曲线
                                       
                                                                                    氟甲砜霉素在0μg/L~2μg/L浓度范围内线性曲线
5、精密度/精密度验证
    根据27404要求,如图,确定变异系数在范围之内。
                                               
                                                                                              27404对精密度/重复性的要求
                                               
                                                                                                            方法确认数据
6、回收率确认
      不同的项目,甚至不同的浓度,对应不同的回收率,在本标准中,参照27404要求,如图,确定回收率范围,下结论判断是否合格。

                                                         
                                                                                                                27404对回收率的要求
                                                     
                                                     
                                                                                                                                    方法确认数据
7、结论
    经证实,本实验室满足《GB/T 22338-2008 动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定》的要求。
    以上是个人在国标方法确认的全部过程,欢迎大家一起交流讨论。
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氯霉素阳性样品峰形有点差
出峰时间太早了,有杂质干扰
lancelu
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冰snow
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照标准做,甲砜霉素和氟甲砜霉素回收很低,请问楼主碰到过这种问题吗?
hgxbo
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方法确证的过程挺完整的,有做加标回收吗?
vm88
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