原创大赛
安捷伦

主题:【第十一届原创】LCMSMS法测定动物源食品中硝基呋喃代谢物残留量的前处理分析

浏览 |回复24 电梯直达
weiqing
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
维权声明:本文为weiqing1983原创作品,本作者与仪器信息网是该作品合法使用者,该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为,我们将追究法律责任。
原理:样品经盐酸水解,用2-硝基苯甲醛过夜衍生,调pH值7.1-7.5后,用乙酸乙酯提取,液相色谱-串联质谱检测,内标法定量。具体分析步骤如下:
1 试样的制备,水解和衍生化
称取2.5g(粉体样品减半,精确至0.01g)制备的样品(鱼虾等取可食部分按标准要求取样),置于50mL塑料具塞离心管中,加入10mL 0.2mol/L盐酸溶液,用匀质机高速匀质1min,再依次加入200µL 10ng/mL 内标标准液, 0.05mol/L的2-硝基苯甲醛衍生剂甲醇溶液400µL,振摇1min,置于37°C,120rpm的恒温摇床中保持16小时。
1.2提取,净化和溶解
将上述衍生溶液取出放置至室温,加入5mL 0.2mol/L磷酸氢二钾溶液,振摇2min。用1mol/L氢氧化钠溶液,0.2mol/L盐酸溶液调节pH约7.1-7.5, (pH计调节,用水清洗电极于离心管中,控制体积不超过20mL)。5000转/min离心10min,取上清液于另一50mL带盖塑料离心管中。加20mL乙酸乙酯, 振摇10分钟, 5000r/min离心5min,吸取上层乙酸乙酯溶液于另一带盖塑料离心管中;残渣中加20mL乙酸乙酯重新提取一次,合并乙酸乙酯层,提取液于 38°C用氮吹仪吹干,加入1.0mL20%甲醇水溶液,涡旋1min,过0.22µm滤膜待进样。
1.3 方法空白
除不加样品外,其余步骤同上。
1.4 标准曲线和QC
1.4.1标准曲线:取5个50mL塑料具塞离心管,分别加入10μL,20μL,40μL,100μL,200μL硝基呋喃代谢物的标准溶液(50ng/mL),除不加样品外,其余步骤同1.1衍生,1.2项净化及溶解的操作。使最终定容浓度为0.5ng/mL, 1.0ng/mL, 2.0ng/mL, 5.0ng/mL, 10.0ng/mL。内标浓度为2.0ng/mL。
1.4.2 QC点:取1个50mL塑料具塞离心管,加入100μL 20 ng/mL的QC混合标准溶液,内标浓度为2.0ng/mL。除不加样品外,其余步骤同1.1衍生,1.2项净化及溶解的操作。使最终定容浓度为2.0ng/mL。
1.5 加标试验
称取2.5g(粉体样品减半,精确至0.01g)样品,置于50 mL塑料具塞离心管中,加入40μL 50ng/mL标准溶液,其余步骤同1.1衍生,1.2项净化及溶解的操作。使最终定容浓度为2.0ng/mL。
1.6 仪器参数条件可参考GB/T 21311-2007。
1.7 定量计算
  结果计算公式为 :
                      X = c • V / m
式中:
X---试样中被测组分残留量,单位为(µg/kg);
C---从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度,机读数,单位为(µg /L);
V---样品溶液定容体积,单位为(mL);
M---试样的质量,单位为(g);
注:计算结果需要将空白值扣除。
1.8 方法检测限
水产品及肉类基质:呋喃唑酮的代谢物3-氨基-2-唑烷基酮(AOZ): 0.2µg/kg;呋喃它酮的代谢物5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(AMOZ): 0.2µg/kg;呋喃妥因的代谢物1-氨基-2-内酰脲(AHD) : 0.2µg/kg;呋喃西林的代谢物氨基脲(SEM):0.5µg/kg。
基质干扰较大的粉类基质,方法检测限为: 呋喃唑酮的代谢物3-氨基-2-唑烷基酮(AOZ): 0.5µg/kg;呋喃它酮的代谢物5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(AMOZ): 0.5µg/kg;呋喃妥因的代谢物1-氨基-2-内酰脲(AHD) : 0.5µg/kg;呋喃西林的代谢物氨基脲(SEM):1.0µg/kg。
1.9 质量控制
1.9.1每次试验做一个方法空白,方法空白<0.1ng/mL, 仪器最多间隔20针进1针方法空白.
1.9.2 标准曲线的回归系数大于等于0.995.
1.9.3 QC点的浓度为2.0 ng/mL, 回收率应在80%-120%,仪器最多间隔20针进1针QC.
1.9.4 样品加标试验的回收率在70%-130%。
1.9.5 超过MDL的样品,进行双样定量分析, 相对百分比差值小于20%。
1.9.6 每次实验的同类基质至少做一个平行样.
1.10 注意事项
1.10.1对于含油较多的样品,在净化氮气吹干后,用2mL乙腈溶解,加2mL用乙腈饱和的正己烷去油,弃去上层正己烷,氮气38℃吹干, 加入1.0mL 20%甲醇溶液,涡旋1min,过0.22µm滤膜待进样。
1.10.2 对于动物肌肉、内脏、鱼、虾和肠衣样品GB/T 21311-2007要求称取样品后加入10 mL 50%甲醇水溶液,振荡10 min后,以4000r/min离心5min,弃去液体,残留物加入10 mL 0.2mol/L盐酸溶液,之后步骤同1.1衍生,1.2项净化及溶解的操作。个人认为若样品测定值为阳性,经此步骤处理后结果会减小甚至变为阴性,建议可参考FDA的方法,省去(加入10 mL 50%甲醇水溶液)水洗步骤,更能客观反映样品真实含量。

温馨提示:夏天大家都喜欢吃小龙虾配冰镇啤酒,经检测发现虾类中硝基呋喃代谢物检出率非常高,希望大家最好不要经常吃,偶尔吃一次还是可以滴!
该帖子作者被版主 hujiangtao10 积分, 2经验,加分理由:鼓励原创
为您推荐
0
zyl3367898
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
weiqing
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
原文由 zyl3367898(zyl3367898) 发表:
配个图谱会最好。
公司要求数据不能公开,所以就没配图,见谅哈。
m3069787
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
我是风儿
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
weiqing
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
原文由 m3069787(m3069787) 发表:
SEM会有本底
嗯,每次都作方法空白,本底基本都很小。
weiqing
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
原文由 我是风儿(nphfm2009) 发表:
你们公司还有这个规定啊
是啊,数据要求保密,所以都没有上图谱。
Insm_8abeeb7d
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
我们实验室就对要不要加50%的甲醇水溶液洗有疑问,因为做过比对,用甲醇水洗过和没洗差异很大,我们上次做能力验证就因为这个坑导致所有的结果都有问题,因为新人没有经验,我们找了很多的原因,就是因为国标要求,才洗,洗了结果又不对。
symmacros
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
前处理的步骤介绍的很详细,好像没看到分析?
weiqing
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
原文由 Insm_8abeeb7d(Insm_8abeeb7d) 发表:
我们实验室就对要不要加50%的甲醇水溶液洗有疑问,因为做过比对,用甲醇水洗过和没洗差异很大,我们上次做能力验证就因为这个坑导致所有的结果都有问题,因为新人没有经验,我们找了很多的原因,就是因为国标要求,才洗,洗了结果又不对。
是啊,洗后结果会小很多。
weiqing
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
原文由 symmacros(jimzhu) 发表:
前处理的步骤介绍的很详细,好像没看到分析?
我们用的是内标法定量,因为公司有规定,数据和图谱就没发出来,见谅。